本文關(guān)鍵詞：小牛血去蛋白提取物對缺氧模型小鼠能量代謝作用的研究

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【摘要】：小牛血去蛋白提取物(Deproteinated Extract from Calf Blood,DECB)是從發(fā)育旺盛的小牛血清或全血中提取得到的具有生物活性的小分子混合物,其中包括低分子多肽、核苷、氨基酸和寡糖等有機(jī)成分和一些無機(jī)鹽類,它能夠提高缺氧組織細(xì)胞對血液中氧和葡萄糖的轉(zhuǎn)運及利用,從而加快線粒體的氧化磷酸化進(jìn)程,為缺氧細(xì)胞提供能量,改善細(xì)胞能量代謝。該藥物臨床應(yīng)用廣泛,但其具體的作用機(jī)制尚不明確。目的:探討小牛血去蛋白提取物對小鼠肝臟能量代謝的影響,并且探究該影響作用的相關(guān)因子,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:1、利用軟電離法和飛行質(zhì)譜檢測器檢測小牛血去蛋白提取物的分子量范圍、利用瓦氏呼吸儀測定該藥物的呼吸活性。2、通過整體水平實驗觀察小牛血去蛋白提取對能量代謝的作用,ICR小鼠24只隨機(jī)分為四組,即空白組(CON)、給藥組(CON+DECB)、模型組(M),模型給藥組(M+DECB),空白組(CON)和模型組(M)給予蒸餾水飼養(yǎng)5周,給藥組(CON+DECB)和模型給藥組(M+DECB)連續(xù)皮下注射小牛血去蛋白提取物注射液5周,劑量為165mg/kg。末次給藥結(jié)束1h后,將模型組(M)和模型給藥組(M+DECB)分別放置于獨立密封磨口玻璃瓶中,使小鼠處于缺氧狀態(tài)。嚴(yán)重缺氧會導(dǎo)致抽搐,以小鼠出現(xiàn)哮喘式呼吸并伴有輕微抽搐為指征記錄小鼠耐缺氧時間。立即眼球取血,并取心臟、大腦、肝臟等組織;測定血清、心臟組織、大腦組織、肝臟組織中葡萄糖的含量;測定心臟、大腦、肝臟組織中的ATP含量;測定血液、肝臟組織、大腦組織中的乳酸含量以及大腦、心臟、肝臟組織中蛋白含量的變化。3、使用STEM軟件將篩選得到的顯著性差異基因進(jìn)行聚類分析,然后基于NCBI Gene Ontology數(shù)據(jù)庫對這些基因進(jìn)行GO注釋,并通過DAVID網(wǎng)站對糖脂代謝途徑中的基因進(jìn)行功能分析和生物通路富集分析,最后進(jìn)行實時定量PCR驗證。結(jié)果:1、質(zhì)譜檢測結(jié)果顯示,小牛血去蛋白提取物的分子量分布3000D;其呼吸活性值為:QO2(空白)=2.03,QO2(樣品)=5.25,SI=2.59。2、生化檢測結(jié)果顯示:與模型組相比(M),模型給藥組(M+DECB)耐缺氧時間顯著(P㩳0.05)延長;與空白組相比(CON),給藥組(CON+DECB)中葡萄糖的含量顯著降低(P㩳0.05),與模型組相比(M),模型給藥組(M+DECB)小鼠血糖含量顯著降低(P㩳0.01),與空白組(CON)相比,給藥組(CON+DECB)心臟組織中和肝臟組織中的糖含量顯著升高(P0.05),與模型組(M)相比,模型給藥組(M+DECB)小鼠大腦(P0.01)、心臟(P0.05)、肝臟(P0.01)中糖的含量顯著升高;小牛血去蛋白提取物可顯著降低缺氧小鼠血液、大腦、肝臟中的乳酸含量(P0.01);小牛血去蛋白提取物可以顯著提高缺氧小鼠腦、心、肝的ATP含量(P0.01);小牛血去蛋白提取物可以顯著增加生理狀態(tài)下小鼠大腦(P0.05)、心臟(P0.01)、肝臟(P0.01)中的蛋白含量,同時該藥物也可以顯著增加缺氧模型小鼠心臟(P0.01)、肝臟(P0.01)中蛋白的含量:3、以給藥組(CON+DECB)和空白組(CON)為對象進(jìn)行m RNA表達(dá)譜芯片研究,共篩選到1186與能量代謝相關(guān)的差異表達(dá)基因。其中上調(diào)基因495個,占基因總數(shù)的41.7%,下調(diào)基因691個,占基因總數(shù)的58.3%。又通過基因功能聚類分析,糖脂代謝途徑中13個基因與能量代謝最為緊密,并選擇Hmgcs2、Cpt1a、Angptl4、Cyp8b1、Ehhadh基因進(jìn)行實時定量PCR驗證,這5個基因在空白組(CON)和給藥組(CON+DECB)的表達(dá)比值分別為0.31、0.24、0.15、0.18、0.25,每個因子相對應(yīng)的P值是0.016、0.006、0.005、0.027、0.011。結(jié)論:1、小牛血去蛋白提取物可以延長缺氧模型小鼠的的耐缺氧時間,改善能量代謝。2、HNGCS2、Cpt1a、Angptl4、Cyp8b1、Ehhadh可能是小牛血去蛋白提取物改善小鼠肝臟能量代謝的5個關(guān)鍵因子。
【關(guān)鍵詞】：小牛血去蛋白提取物 能量代謝 耐缺氧 mRNA表達(dá)譜芯片
【學(xué)位授予單位】：北華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R364.4;R-332
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-17
• 第1章 緒論17-27
• 1.1 引言17-18
• 1.2 小牛血去蛋白提取物的研究進(jìn)展18-24
• 1.2.1 小牛血去蛋白提取物制備工藝的研究進(jìn)展18-19
• 1.2.2 小牛血去蛋白提取物活性成分的研究進(jìn)展19-20
• 1.2.3 小牛血去蛋白提取物活性測定方法的改進(jìn)20-22
• 1.2.4 小牛血去蛋白提取物藥物劑型的研究進(jìn)展22-23
• 1.2.5 應(yīng)用前景及存在問題23-24
• 1.3 基因芯片技術(shù)與應(yīng)用24-27
• 1.3.1 淺談基因芯片技術(shù)24-25
• 1.3.2 基因芯片在藥學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用現(xiàn)狀25-27
• 第2章 材料和儀器27-30
• 2.1 實驗動物27
• 2.2 實驗試劑與試藥27-28
• 2.3 實驗儀器28-30
• 第3章 小牛血去蛋白提取物注射液理化性質(zhì)的研究30-37
• 3.1 實驗方法30-33
• 3.1.1 藥物總固體含量的測定30
• 3.1.2 利用高效液相色譜儀進(jìn)行藥物定性分析30-31
• 3.1.3 對藥物分子量的分析確定31
• 3.1.4 對藥物活性的測定31-33
• 3.2 實驗結(jié)果33-35
• 3.2.1 小牛血去蛋白提取物注射液的總固體含量33
• 3.2.2 HPLC測定結(jié)果33-34
• 3.2.3 MS測定結(jié)果34-35
• 3.2.4 呼吸活力指數(shù)35
• 3.3 討論35-37
• 第4章 小牛血去蛋白提取物注射液對缺氧模型小鼠的作用37-55
• 4.1 實驗方法37-41
• 4.1.1 給藥與飼養(yǎng)37
• 4.1.2 建立動物模型37-38
• 4.1.3 取材38
• 4.1.4 組織中生化指標(biāo)的檢測38-40
• 4.1.5 數(shù)據(jù)分析40-41
• 4.2 實驗結(jié)果41-51
• 4.2.1 小牛血去蛋白提取物注射液對小鼠耐缺氧時間的影響41-42
• 4.2.2 小牛血去蛋白提取物注射液對小鼠血糖的影響42-43
• 4.2.3 小牛血去蛋白提取物注射液對小鼠大腦、心臟、肝臟組織中糖含量的影響43-44
• 4.2.4 小牛血去蛋白提取物對小鼠血清中乳酸含量的影響44-46
• 4.2.5 小牛血去蛋白提取物注射液對急性缺氧小鼠大腦、肝臟組織中乳酸含量的影響46-47
• 4.2.6 小牛血去蛋白提取物注射液對小鼠大腦、心臟、肝臟組織中ATP含量的影響47-49
• 4.2.7 小牛血去蛋白提取物注射液對小鼠大腦、心臟、肝臟組織中蛋白含量的影響49-51
• 4.3 討論51-55
• 第5章 基于mRNA表達(dá)譜芯片對小牛血去蛋白提取物改善小鼠能量代謝相關(guān)因子的研究55-74
• 5.1 實驗方法56-62
• 5.1.1 RNA提取56-57
• 5.1.2 RNA質(zhì)量檢測57-58
• 5.1.3 樣品標(biāo)記和雜交58
• 5.1.4 數(shù)據(jù)采集和標(biāo)準(zhǔn)化58-59
• 5.1.5 差異表達(dá)基因分析和功能聚類分析59
• 5.1.6 Real time PCR驗證59-62
• 5.1.7 數(shù)據(jù)分析62
• 5.2 實驗結(jié)果62-69
• 5.2.1 RNA質(zhì)量檢測結(jié)果62
• 5.2.2 RNA的完整性檢測和變性瓊脂糖凝膠電泳gDNA污染試驗結(jié)果62-63
• 5.2.3 芯片雜交結(jié)果63-65
• 5.2.4 基因功能聚類結(jié)果65-68
• 5.2.5 Real Time PCR驗證結(jié)果68-69
• 5.3 討論69-74
• 結(jié)論74-75
• 參考文獻(xiàn)75-83
• 作者簡介及科研成果83-85
• 致謝85

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本文編號：930965