本文關(guān)鍵詞：卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白74B對(duì)纖毛生成和細(xì)胞周期調(diào)控作用研究

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【摘要】：背景卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白(CCDC)參與基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期過程,并調(diào)控惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)行為,然而多數(shù)CCDC的生物學(xué)功能目前尚未明確。目的探討CCDC74B的細(xì)胞定位及對(duì)纖毛生成和細(xì)胞周期的影響。方法 2013年3—9月通過構(gòu)建在人視網(wǎng)膜色素上皮(RPE1)中的Tet-On表達(dá)系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)CCDC74B在細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá),然后通過細(xì)胞免疫熒光染色觀察CCDC74B的細(xì)胞定位,通過小干擾RNA(siRNA)轉(zhuǎn)染敲除CCDC74B在RPE1細(xì)胞中的表達(dá),分為對(duì)照組、siRNA#1組、siRNA#2組,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測CCDC74B mRNA表達(dá)水平;采用細(xì)胞免疫熒光染色及流式細(xì)胞術(shù)觀察下調(diào)CCDC74B表達(dá)后纖毛生成情況和對(duì)細(xì)胞周期分布的影響。結(jié)果在正常上皮細(xì)胞中,CCDC74B位于中心體,細(xì)胞免疫熒光染色示,下調(diào)CCDC74B表達(dá)后細(xì)胞初級(jí)纖毛生成。siRNA#1組及siRNA#2組轉(zhuǎn)染后36 h及48 h纖毛生成率分別高于對(duì)照組(P0.05)。RT-PCR法結(jié)果顯示,siRNA#1組及siRNA#2組均有效抑制了CCDC74B mRNA表達(dá)。細(xì)胞免疫熒光染色示,下調(diào)CCDC74B表達(dá)后cyclin A表達(dá)減少,提示存在細(xì)胞周期停滯;流式細(xì)胞術(shù)檢測示,下調(diào)CCDC74B表達(dá)后G_1期細(xì)胞比例增高,S期及G_2/M期細(xì)胞比例減少。結(jié)論中心體蛋白CCDC74B在細(xì)胞增殖過程中參與對(duì)纖毛生成和細(xì)胞周期的調(diào)控。
【作者單位】： 同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院血液科;
【關(guān)鍵詞】： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白 纖毛 細(xì)胞周期 細(xì)胞增殖
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31301118)
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： Regulatory Effect of CCDC74B on Cilia Formation and Cell Cycle LI Ping,FANG Xia,CAO Yu-na,et al.Departmentof Hematology,Tongji Hospital of Tongji University,Shanghai 200065,China卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白(CCDC)是其序列中存在一個(gè)或數(shù)個(gè)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域而被命名的一類

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1 白靜;張自輝;王嘉軍;葉紅;;STAT3與卵巢癌的關(guān)系研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2014年10期

2 宋濤;蘭小鵬;;Ro52蛋白的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2010年06期

3 ;[J];;年期

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本文編號(hào)：922511