本文關(guān)鍵詞：7型庚型肝炎病毒包膜糖蛋白E2基因的克隆及原核表達分析

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【摘要】：為了探究7型庚型肝炎病毒E2基因編碼蛋白作為ELISA試劑盒研發(fā)所需檢測抗原的可能性,建立更為可靠的GBV-C檢測方法,本研究應(yīng)用在線軟件對GBV-C E2基因序列的編碼區(qū)進行生物信息學(xué)分析,預(yù)測了E2基因編碼蛋白的抗原表位、空間結(jié)構(gòu)及線性B細胞表位等;通過逆轉(zhuǎn)錄PCR從7型GBV-C病毒中克隆出E2基因片段,將其克隆到pET-32a載體上,重組載體pET-32a-E2轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21后誘導(dǎo)表達,用12%SDS-PAGE檢測,結(jié)果重組蛋白主要以包涵體形式存在,其分子量大小約為55kD,利用His標簽抗體對重組蛋白進行Western-blotting驗證。結(jié)果表明GBV-C E2蛋白有多個抗原表位點,克隆的E2基因序列長度為945bp,重組蛋白以包涵體形式表達,其分子量大小與預(yù)期一致,此研究為GBV-C檢測試劑盒的研制工作奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 庚型肝炎病毒 包膜糖蛋白 克隆 表達分析
【基金】：國家自然科學(xué)基金(項目號:81360247)
【分類號】：R373.21
【正文快照】： 庚型肝炎病毒(GBV-C)屬黃病毒科、Pegivirus病毒屬、單鏈RNA病毒。GBV-C基因組全長約9.4kp,包含一個可以編碼6個(E1、E2、NS2、NS3、NS4及NS5)多聚蛋白前體的開放閱讀框[1]。GBV-C的傳播途徑與HIV病毒相似,主要通過母嬰、性以及血液傳播[2]。在發(fā)達國家,GBV-C在普通人群中的感

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本文編號：919443