發(fā)布時(shí)間：2017-09-23 14:15

  本文關(guān)鍵詞：IRF3 shRNA腺病毒包裝及其對(duì)RAW264.7細(xì)胞IRF3表達(dá)的抑制效應(yīng)

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【摘要】：目的重組并包裝干擾素調(diào)節(jié)因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,sh RNA)腺病毒,研究該病毒對(duì)RAW264.7細(xì)胞IRF3基因表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖活性和吞噬功能的影響。方法采用酶切和連接方法構(gòu)建p Adeno-U6-CMV-EGFP-IRF3 sh RNA質(zhì)粒;借助Ad MaxTM病毒包裝系統(tǒng)完成IRF3基因干擾腺病毒的重組與包裝;IRF3基因表達(dá)分別采用real-time PCR和Western blot分析方法檢測(cè);RAW264.7細(xì)胞的增殖活性和吞噬功能分別采用CCK8分析和吞墨試驗(yàn)檢測(cè)。結(jié)果 IRF3基因的干擾片段及對(duì)照序列被正確插入p Adeno-U6-CMV-EGFP質(zhì)粒AgeⅠ和Eco RⅠ酶切位點(diǎn)之間,經(jīng)PCR擴(kuò)增及DNA測(cè)序證實(shí);RAW264.7細(xì)胞組成性表達(dá)IRF3基因,針對(duì)IRF3基因后部序列的干擾腺病毒Y2147明顯抑制了IRF3 m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá),而針對(duì)IRF3基因前部及中部序列及對(duì)照序的干擾腺病毒對(duì)IRF3的表達(dá)無(wú)明顯沉默或封閉效應(yīng);腺病毒Y2147對(duì)RAW264.7細(xì)胞的增殖活性及吞噬功能無(wú)明顯不良影響。結(jié)論成功構(gòu)建并包裝了IRF3 sh RNA腺病毒,該病毒能有效抑制RAW264.7細(xì)胞IRF3 m RNA和蛋白表達(dá),且對(duì)細(xì)胞的增殖活性和吞噬能力無(wú)不良影響。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)附屬上海松江中心醫(yī)院感染科/上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院松江分院感染科;上海市同濟(jì)醫(yī)院消化內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 干擾素調(diào)節(jié)因子 短發(fā)夾RNA 腺病毒 病毒包裝 RAW.細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81070357,30660066)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 干擾素調(diào)節(jié)因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)基因位于19號(hào)染色體,由8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子組成。其基因長(zhǎng)度6.3 kb,編碼相對(duì)分子質(zhì)量55 000的蛋白質(zhì)。IRF3以單體無(wú)活性形式組成性Target geneIRF3IRF3IRF3ControlNumberY2145Y2146Y2147Y201si RNA target gene(5′→3，

本文編號(hào)：905701