本文關(guān)鍵詞：利用piggyBac轉(zhuǎn)座子構(gòu)建小鼠誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞及其鑒定

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【摘要】：目的:利用piggyBac轉(zhuǎn)座子載體攜帶鼠源Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc 4個(gè)核轉(zhuǎn)錄因子,重編程胎鼠成纖維細(xì)胞(MEFs)為誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(iPSCs),并探討其作用效果。方法:分離Oct4-GFP小鼠的MEFs,將攜帶鼠源Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc等4個(gè)基因的piggyBac轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)入至MEFs;觀察iPSCs克隆形成過程的形態(tài)表現(xiàn);分析iPSCs染色體組成,評(píng)價(jià)iPSCs的核型變化。RT-PCR法檢測(cè)小鼠iPSCs中胚胎干細(xì)胞(ESCs)相關(guān)基因Oct4、Nanog和FGF4的表達(dá);免疫熒光、堿性磷酸酶染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠iPSCs中SSEA-1和Nanog蛋白表達(dá)。將iPSCs接種到NOD-SCID小鼠腹股溝進(jìn)行畸胎瘤實(shí)驗(yàn),4周后取畸胎瘤制備組織切片進(jìn)行HE染色,觀察組織分化情況。結(jié)果:通過piggyBac轉(zhuǎn)座子成功構(gòu)建iPSCs,其具有正常的核型,形態(tài)與小鼠ESCs相似,克隆邊界清晰、呈圓形或卵圓形,克隆內(nèi)細(xì)胞致密、核大。RT-PCR和免疫熒光染色分析,iPSCs可表達(dá)多能性基因和蛋白(Oct4、Sox2、Kif4和c-Myc)。在免疫缺陷小鼠體內(nèi)接種iPSCs可形成具有3個(gè)胚層組織的畸胎瘤。結(jié)論:以piggyBac轉(zhuǎn)座子為載體將Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc 4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因?qū)隡EFs,可以成功誘導(dǎo)MEFs成為具有ESCs特征的正常核型iPSCs。
【作者單位】： 暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院廣東省深圳市人民醫(yī)院干細(xì)胞與細(xì)胞治療重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： piggyBac 重編程 小鼠胚胎纖維細(xì)胞 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題(81270857) 廣東省科技廳自然科學(xué)基金資助課題(S2013010014832) 廣東省深圳市科技創(chuàng)新委員會(huì)科技計(jì)劃項(xiàng)目資助課題(GJHZ20120618153934353,JCYJ2061853743791)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： Evans等[1]第一次從小鼠囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中分離培養(yǎng)出多潛能性的胚胎干細(xì)胞(embryonic stemcells,ESCs),隨后根據(jù)其分化的全能性展開了各項(xiàng)研究。研究[2-3]顯示:ESCs可分化成具有神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞和胰島β細(xì)胞等具有功能的體細(xì)胞,為阿爾茨海默癥、心肌梗死和糖尿病等疾病的細(xì)

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：885261