本文關(guān)鍵詞：抗結(jié)核分枝桿菌DNA疫苗的構(gòu)建及免疫原性研究

  更多相關(guān)文章： 結(jié)核分枝桿菌 DNA疫苗 構(gòu)建 轉(zhuǎn)染 免疫

【摘要】：目的:構(gòu)建抗結(jié)核分枝桿菌(TB)DNA疫苗并進(jìn)行體內(nèi)外的鑒定。方法:采用PCR技術(shù)分別擴(kuò)增TB(H37Rv)抗原單基因Ag85a、Ag85b以及融合基因Ag85a-Esat6和Ag85b-Esat6融合基因,其5'端均含人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)信號(hào)肽,將目的基因分別亞克隆于p VAX1真核表達(dá)載體,得到Ag85a/p VAX1、Ag85b/p VAX1、Ag85a-Esat6/p VAX1和Ag85b-Esat6/p VAX1四種質(zhì)粒;經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定正確后,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞48 h,取上清液檢測(cè)目的蛋白表達(dá)情況;利用在體電脈沖技術(shù)(EP)將質(zhì)粒注射BALB/c小鼠雙側(cè)脛前肌,檢測(cè)特異性的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。結(jié)果:四種質(zhì)�；蚱畏较�、序列正確;Western blot檢測(cè)COS-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后的上清,均有清晰特異性的目的蛋白條帶,并定量檢測(cè)到Esat6蛋白的表達(dá)水平可達(dá)10 ng/ml;小鼠免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,僅質(zhì)粒Ag85b/p VAX1和Ag85a-Esat6/p VAX1可誘導(dǎo)針對(duì)結(jié)核抗原分泌高水平IFN-γ的Th1型免疫應(yīng)答和特異性殺傷應(yīng)答,其中通過(guò)ELISA檢測(cè)小鼠血清的lg G和ELISPOT檢測(cè)脾細(xì)胞分泌IFN-γ的實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性率均為100%,且Ag85a-Esat6/p VAX1的效果較好些,與卡介苗具有顯著性差異。結(jié)論:成功構(gòu)建了抗TB的DNA疫苗,其中Ag85a-Esat6/p VAX1質(zhì)粒DNA疫苗的免疫效果較好,為進(jìn)一步研發(fā)治療性的TB DNA疫苗奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 解放軍第四五八醫(yī)院全軍肝病中心;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 DNA疫苗 構(gòu)建 轉(zhuǎn)染 免疫
【基金】：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015A010107011)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 結(jié)核病是一種由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,TB)引起的嚴(yán)重危害人類健康的傳染性疾病�？ń槊�(Bacille calmette guerin,BCG)自1921年發(fā)現(xiàn)以來(lái)一直受到人們的關(guān)注,是目前唯一上市用于兒童期結(jié)核病的預(yù)防,但是,卡介苗的保護(hù)效率隨時(shí)間的推移而逐漸降低,而且對(duì)于不

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