本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞轉(zhuǎn)染中單克隆與混克隆干擾基因效率的比較

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【摘要】：目的比較細(xì)胞轉(zhuǎn)染中單克隆與混克隆干擾基因效率。方法采用胃泌素特異干擾載體轉(zhuǎn)染人胃癌原代細(xì)胞株L25,經(jīng)G418抗性篩選獲得混克隆和單克隆細(xì)胞,應(yīng)用RT-PCR、Western blot和免疫熒光三種方法對混克隆細(xì)胞和單克隆細(xì)胞干擾胃泌素基因的效率進(jìn)行比較。結(jié)果 RT-PCR結(jié)果顯示混克隆細(xì)胞胃泌素mRNA表達(dá)水平被明顯抑制。在挑取的10株單克隆細(xì)胞中,胃泌素的表達(dá)均受到干擾,其效果有差異,其中有2株單克隆細(xì)胞pshRNA-1、pshRNA-10胃泌素mRNA表達(dá)水平抑制率達(dá)到86%,抑制效率與混克隆細(xì)胞相同,其他8株單克隆細(xì)胞的平均抑制率為31%。Western blot和免疫熒光結(jié)果均顯示單克隆細(xì)胞pshRNA-1、pshRNA-10與混克隆細(xì)胞在胃泌素蛋白水平的干擾效果相同。結(jié)論采用混克隆細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性鑒定和后續(xù)基因表達(dá)水平研究,實(shí)驗(yàn)信息量大、周期短、污染幾率小、可重復(fù)性強(qiáng),是一種省時、簡便、高效的方法。
【作者單位】： 青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;青海大學(xué)附屬醫(yī)院心胸外科;
【關(guān)鍵詞】： 混克隆細(xì)胞 單克隆細(xì)胞 干擾效率
【基金】：國家自然科學(xué)基金(編號:81550043) 青海省自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(編號:2015-ZJ-940Q)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 分子克隆實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)常需要把外源性的DNA通過載體導(dǎo)入細(xì)胞,以便進(jìn)行基因功能、基因調(diào)控等方面的實(shí)驗(yàn)[1-3]。這些研究要求外源基因能夠穩(wěn)定整合到宿主染色體的細(xì)胞中,即我們所說的克隆化細(xì)胞[4-5]。以往常用的方法是選擇性標(biāo)記,將攜帶外源基因的載體加上neo抗性基因,用含G418的

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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本文編號：859210