本文關鍵詞：馬骨髓間充質(zhì)干細胞系的建立及向軟骨細胞誘導分化的研究

  更多相關文章： 馬 骨髓間充質(zhì)干細胞 細胞培養(yǎng) 誘導分化 軟骨細胞

【摘要】：本研究首先建立了馬骨髓間充質(zhì)干細胞系,對其生物學特征和干細胞特性進行了鑒定(CD34、CD44、CD45、CD90、CD105、SOX2、Nanog),并在特定的軟骨分化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),使其分化為軟骨細胞,經(jīng)組織學阿爾新藍染色、對軟骨細胞的特異表達基因Collagen type Ⅱ進行實時定量PCR鑒定后,發(fā)現(xiàn)在經(jīng)過誘導分化的細胞中出現(xiàn)了類似于軟骨細胞的形態(tài)特征,同時表達了軟骨的特異基因。本實驗的主要研究結(jié)果如下：1、在該實驗中建立了馬骨髓間充質(zhì)干細胞系,發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細胞的形態(tài)均呈長梭型,類似于成纖維細胞,通過對該細胞系的P3細胞計數(shù)后,發(fā)現(xiàn)生長曲線呈“S”型,經(jīng)計算,細胞倍增時間為31h。2、對骨髓間充質(zhì)干細胞的P3代細胞進行PCR分析,發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細胞表達了轉(zhuǎn)錄因子SOX2、NANOG,以及細胞表面特異性基因CD14、D90、 CD105,但不表達造血干細胞因子CD34和白細胞因子CD45。3、將骨髓間充質(zhì)干細胞分別在誘導培養(yǎng)液和普通培養(yǎng)液中進行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)經(jīng)誘導培養(yǎng)的分化組細胞形態(tài)發(fā)生了明顯的變化,呈“石頭狀”,而普通培養(yǎng)的對照組細胞形態(tài)沒有任何變化。接著對兩組細胞分別進行阿爾新藍染色的組織學鑒定,發(fā)現(xiàn)分化組細胞被染成了藍色,說明有蛋白聚糖的分泌,而對照組細胞沒有著色；最后以Collagen type Ⅱ為目的基因、18S為內(nèi)參基因,對兩組細胞進行實時定量PCR鑒定,結(jié)果顯示,分化后的細胞有Col的表達,但對照組細胞沒有。綜上所述,該實驗建立了馬骨髓間充質(zhì)干細胞系,并將其誘導分化為軟骨細胞。本研究為馬運動損傷在細胞的臨床治療實踐中提供了科學的理論依據(jù)和技術方法,同時也為人類臨床醫(yī)學的細胞治療提供了一定的方法和借鑒。
【關鍵詞】：馬 骨髓間充質(zhì)干細胞 細胞培養(yǎng) 誘導分化 軟骨細胞
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 縮略語表8-9
• 1 引言9-14
• 1.1 間充質(zhì)干細胞的研究進展9-12
• 1.1.1 干細胞綜述9
• 1.1.2 間充質(zhì)干細胞綜述9-10
• 1.1.3 骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學特性10-11
• 1.1.4 骨髓間充質(zhì)干細胞的多向誘導分化11-12
• 1.2 間充質(zhì)干細胞的應用及存在的問題12-13
• 1.2.1 間充質(zhì)干細胞的應用12-13
• 1.2.2 間充質(zhì)干細胞的研究展望13
• 1.3 本研究的目的意義及主要內(nèi)容13-14
• 1.3.1 研究的目的及意義13
• 1.3.2 主要研究內(nèi)容13-14
• 2 馬骨髓間充質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng)14-23
• 2.1 材料與方法14-17
• 2.1.1 實驗材料14
• 2.1.2 實驗試劑14
• 2.1.3 實驗儀器及耗材14
• 2.1.4 實驗方法14-17
• 2.2 實驗結(jié)果與分析17-21
• 2.2.1 馬BMSC的體外分離培養(yǎng)17-19
• 2.2.2 細胞生長曲線的繪制及倍增時間的計算19-20
• 2.2.3 馬BMSC干細胞轉(zhuǎn)錄因子基因的檢測20-21
• 2.3 討論21-22
• 2.3.1 馬BMSCs的分離與培養(yǎng)21-22
• 2.3.2 細胞凍存22
• 2.3.3 馬BMSCs的生物學特性22
• 2.4 小結(jié)22-23
• 3 馬骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨誘導分化及鑒定23-37
• 3.1 材料與方法23-27
• 3.1.1 實驗材料23
• 3.1.2 實驗試劑23
• 3.1.3 實驗儀器及耗材23
• 3.1.4 實驗方法23-27
• 3.2 實驗結(jié)果與分析27-35
• 3.2.1 形態(tài)學鑒定27-29
• 3.2.2 組織學鑒定29-30
• 3.2.3 基因鑒定30-32
• 3.2.4 實時定量PCR32-35
• 3.3 討論35-36
• 3.4 小結(jié)36-37
• 4 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻39-43
• 作者簡介43

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本文編號：857606