發(fā)布時(shí)間：2017-09-15 16:22

  本文關(guān)鍵詞：馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系的建立及向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究

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【摘要】：本研究首先建立了馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系,對(duì)其生物學(xué)特征和干細(xì)胞特性進(jìn)行了鑒定(CD34、CD44、CD45、CD90、CD105、SOX2、Nanog),并在特定的軟骨分化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),使其分化為軟骨細(xì)胞,經(jīng)組織學(xué)阿爾新藍(lán)染色、對(duì)軟骨細(xì)胞的特異表達(dá)基因Collagen type Ⅱ進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR鑒定后,發(fā)現(xiàn)在經(jīng)過誘導(dǎo)分化的細(xì)胞中出現(xiàn)了類似于軟骨細(xì)胞的形態(tài)特征,同時(shí)表達(dá)了軟骨的特異基因。本實(shí)驗(yàn)的主要研究結(jié)果如下：1、在該實(shí)驗(yàn)中建立了馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系,發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)均呈長(zhǎng)梭型,類似于成纖維細(xì)胞,通過對(duì)該細(xì)胞系的P3細(xì)胞計(jì)數(shù)后,發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)曲線呈“S”型,經(jīng)計(jì)算,細(xì)胞倍增時(shí)間為31h。2、對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的P3代細(xì)胞進(jìn)行PCR分析,發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)了轉(zhuǎn)錄因子SOX2、NANOG,以及細(xì)胞表面特異性基因CD14、D90、 CD105,但不表達(dá)造血干細(xì)胞因子CD34和白細(xì)胞因子CD45。3、將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分別在誘導(dǎo)培養(yǎng)液和普通培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)的分化組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯的變化,呈“石頭狀”,而普通培養(yǎng)的對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)沒有任何變化。接著對(duì)兩組細(xì)胞分別進(jìn)行阿爾新藍(lán)染色的組織學(xué)鑒定,發(fā)現(xiàn)分化組細(xì)胞被染成了藍(lán)色,說明有蛋白聚糖的分泌,而對(duì)照組細(xì)胞沒有著色；最后以Collagen type Ⅱ?yàn)槟康幕颉?8S為內(nèi)參基因,對(duì)兩組細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR鑒定,結(jié)果顯示,分化后的細(xì)胞有Col的表達(dá),但對(duì)照組細(xì)胞沒有。綜上所述,該實(shí)驗(yàn)建立了馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系,并將其誘導(dǎo)分化為軟骨細(xì)胞。本研究為馬運(yùn)動(dòng)損傷在細(xì)胞的臨床治療實(shí)踐中提供了科學(xué)的理論依據(jù)和技術(shù)方法,同時(shí)也為人類臨床醫(yī)學(xué)的細(xì)胞治療提供了一定的方法和借鑒。
【關(guān)鍵詞】：馬 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 誘導(dǎo)分化 軟骨細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 縮略語表8-9
• 1 引言9-14
• 1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展9-12
• 1.1.1 干細(xì)胞綜述9
• 1.1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞綜述9-10
• 1.1.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性10-11
• 1.1.4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的多向誘導(dǎo)分化11-12
• 1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用及存在的問題12-13
• 1.2.1 間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用12-13
• 1.2.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的研究展望13
• 1.3 本研究的目的意義及主要內(nèi)容13-14
• 1.3.1 研究的目的及意義13
• 1.3.2 主要研究?jī)?nèi)容13-14
• 2 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)14-23
• 2.1 材料與方法14-17
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料14
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑14
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材14
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法14-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析17-21
• 2.2.1 馬BMSC的體外分離培養(yǎng)17-19
• 2.2.2 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制及倍增時(shí)間的計(jì)算19-20
• 2.2.3 馬BMSC干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子基因的檢測(cè)20-21
• 2.3 討論21-22
• 2.3.1 馬BMSCs的分離與培養(yǎng)21-22
• 2.3.2 細(xì)胞凍存22
• 2.3.3 馬BMSCs的生物學(xué)特性22
• 2.4 小結(jié)22-23
• 3 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨誘導(dǎo)分化及鑒定23-37
• 3.1 材料與方法23-27
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料23
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑23
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材23
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法23-27
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析27-35
• 3.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定27-29
• 3.2.2 組織學(xué)鑒定29-30
• 3.2.3 基因鑒定30-32
• 3.2.4 實(shí)時(shí)定量PCR32-35
• 3.3 討論35-36
• 3.4 小結(jié)36-37
• 4 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 作者簡(jiǎn)介43

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本文編號(hào)：857606