本文關(guān)鍵詞：抗CD133納米抗體的分離與鑒定

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【摘要】：[目的]獲得駱駝來(lái)源的與人CD133抗原特異性結(jié)合的納米抗體。[方法]從3峰新疆雙峰駝外周血中分離淋巴細(xì)胞,采用巢式PCR擴(kuò)增獲得cDNA并構(gòu)建VHH天然噬菌體展示文庫(kù)。包被CD133-606于ELISA板,對(duì)天然文庫(kù)進(jìn)行3輪親和篩選,菌落PCR和基因測(cè)序確定能結(jié)合CD133的候選克隆。挑選重復(fù)序列VHH克隆構(gòu)建到pET28a并轉(zhuǎn)BL21用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。IMAC方法純化重組VHH抗體蛋白,Western Blot和ELISA檢測(cè)與CD133的抗原結(jié)合性。[結(jié)果]從109淋巴細(xì)胞中構(gòu)建了庫(kù)容為1.4×109cfu的噬菌體展示文庫(kù),Western Blot及ELISA結(jié)果顯示重復(fù)4次核苷酸序列的VHH-13的納米抗體能與CD133-606有較好的結(jié)合活性。[結(jié)論]通過(guò)對(duì)VHH天然展示文庫(kù)的親和篩選及鑒定,成功獲得了能與人重組CD133胞外區(qū)特異結(jié)合的納米抗體。
【作者單位】： 新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院新疆生物資源基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： CD 納米抗體 天然噬菌體展示文庫(kù) 親和篩選 ELISA
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“駱駝單域抗體框架區(qū)作為小分子抗體通用移植骨架的研究”,No.31370933)資助
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： CD133是一個(gè)五次跨膜糖蛋白,在多種惡性腫瘤細(xì)胞以及腫瘤干細(xì)胞表面高表達(dá),是鑒定腫瘤干細(xì)胞最常用的標(biāo)志物之一。目前,靶向CD133以清除腫瘤干細(xì)胞(CSC)并降低腫瘤的耐藥性已成為開(kāi)發(fā)針對(duì)CSC治療的手段之一[1]。但當(dāng)前獲得的抗CD133抗體,包括AC133、293C3和AC141等主要用于鑒

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鐘立業(yè);杜欣;耿素霞;翁建宇;鄭海濤;吳穗晶;李揚(yáng)秋;;CD133在骨髓增生異常綜合征患者中的表達(dá)及臨床意義[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年05期

2 劉壯;唐文玨;劉紅艷;韋紅英;雷永紅;泥永安;廖必財(cái);蔣雪雯;;CD133表達(dá)與兒童急性髓細(xì)胞白血病臨床特征的相關(guān)性研究[J];中國(guó)小兒血液與腫瘤雜志;2012年05期

3 劉佳云;陳代雄;章濤;方寧;劉祖林;劉金偉;;人胎盤CD133~+、CD133~-細(xì)胞組份中高增殖潛能集落形成細(xì)胞及其表型特征的初步探討[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年02期

4 趙文理;聶述山;許云云;張艷蘭;郭豆豆;潘健;汪家敏;張學(xué)光;;CD133兩種亞型分子在兒童B系急性淋巴細(xì)胞白血病中的表達(dá)及其臨床意義[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2012年03期

5 劉振林;劉曉智;陳鐳;姜忠敏;劉洪;趙玉軍;史萬(wàn)超;李罡;;CD133~+膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的分離與惡性行為特征[J];中國(guó)神經(jīng)腫瘤雜志;2012年02期

6 劉佳云;陳代雄;方寧;章濤;劉祖林;祁瑩;萬(wàn)衛(wèi)紅;劉金偉;;人胎盤CD133~+細(xì)胞具有高增殖潛能集落形成細(xì)胞特性[J];解剖學(xué)報(bào);2008年06期

7 汪家敏;陳永井;張光波;李芳;胡玉敏;張學(xué)光;;人CD133基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的建立及其生物學(xué)功能的初步研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年01期

8 金世龍;黃中榮;陳華;余天霧;曹洪;龍運(yùn)全;周健;李鶴;茍毅;李遠(yuǎn);廖娟;;CD13~+CD133~+和CD13_-CD133_-肝癌細(xì)胞的生物學(xué)差異及臨床意義[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2013年08期

9 張鵬;龔飛榮;陸樹(shù)洋;孫曉寧;程樹(shù)軍;;CD133功能化肝素/膠原蛋白多層膜改性小口徑膨脹體聚四氟乙烯人造血管[J];華東理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年03期

10 李紅;王艷;余莉;趙坡;;肺神經(jīng)內(nèi)分泌癌CD133蛋白表達(dá)臨床病理意義的探討[J];中華腫瘤防治雜志;2011年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 趙文理;張艷蘭;聶述山;許云云;郭豆豆;潘健;季正華;張學(xué)光;;103例B系兒童急性淋巴細(xì)胞白血病CD133兩種亞型分子[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

2 李黎;蔡真;張潔;倪萬(wàn)茂;;CD133~+純化的自體外周血造血干細(xì)胞移植治療惡性淋巴瘤一例報(bào)告[A];2006年浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

3 王占偉;韓少良;杜舟;王鵬飛;賈曾榮;周宏眾;;CD133及B7-H1在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[A];2012年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

4 王芳;尹芳蕊;華云旗;;CD44和CD133在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第九屆全國(guó)代表大會(huì)及學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 柳少光;CD133在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[D];蘭州大學(xué);2015年

2 張艷蘭;CD133分子在兒童B系急性淋巴細(xì)胞白血病表達(dá)的意義及其生物學(xué)特性的初步研究[D];蘇州大學(xué);2012年

3 李廣秋;CD133~+單細(xì)胞源性結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞克隆亞系轉(zhuǎn)移潛能的異質(zhì)性[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

4 吳恭瑾;免疫磁珠法分離純化人腎癌中CD133～+細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2007年

5 李威;胃癌組織中CD44和CD133的表達(dá)及其臨床意義[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2014年

6 朱正;缺氧條件下HIF-1α促進(jìn)CD133陽(yáng)性胰腺癌腫瘤干細(xì)胞增殖的研究[D];蘇州大學(xué);2011年

7 楊熙華;細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44在胃癌中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

8 陳石俊;CD133、LRP16、P53、Ki67在肺神經(jīng)內(nèi)分泌癌中的表達(dá)及臨床病理意義[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2009年

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本文編號(hào)：855046