抗CD133納米抗體的分離與鑒定
本文關(guān)鍵詞:抗CD133納米抗體的分離與鑒定
更多相關(guān)文章: CD 納米抗體 天然噬菌體展示文庫(kù) 親和篩選 ELISA
【摘要】:[目的]獲得駱駝來(lái)源的與人CD133抗原特異性結(jié)合的納米抗體。[方法]從3峰新疆雙峰駝外周血中分離淋巴細(xì)胞,采用巢式PCR擴(kuò)增獲得cDNA并構(gòu)建VHH天然噬菌體展示文庫(kù)。包被CD133-606于ELISA板,對(duì)天然文庫(kù)進(jìn)行3輪親和篩選,菌落PCR和基因測(cè)序確定能結(jié)合CD133的候選克隆。挑選重復(fù)序列VHH克隆構(gòu)建到pET28a并轉(zhuǎn)BL21用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。IMAC方法純化重組VHH抗體蛋白,Western Blot和ELISA檢測(cè)與CD133的抗原結(jié)合性。[結(jié)果]從109淋巴細(xì)胞中構(gòu)建了庫(kù)容為1.4×109cfu的噬菌體展示文庫(kù),Western Blot及ELISA結(jié)果顯示重復(fù)4次核苷酸序列的VHH-13的納米抗體能與CD133-606有較好的結(jié)合活性。[結(jié)論]通過(guò)對(duì)VHH天然展示文庫(kù)的親和篩選及鑒定,成功獲得了能與人重組CD133胞外區(qū)特異結(jié)合的納米抗體。
【作者單位】: 新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院新疆生物資源基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】: CD 納米抗體 天然噬菌體展示文庫(kù) 親和篩選 ELISA
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“駱駝單域抗體框架區(qū)作為小分子抗體通用移植骨架的研究”,No.31370933)資助
【分類號(hào)】:R392
【正文快照】: CD133是一個(gè)五次跨膜糖蛋白,在多種惡性腫瘤細(xì)胞以及腫瘤干細(xì)胞表面高表達(dá),是鑒定腫瘤干細(xì)胞最常用的標(biāo)志物之一。目前,靶向CD133以清除腫瘤干細(xì)胞(CSC)并降低腫瘤的耐藥性已成為開(kāi)發(fā)針對(duì)CSC治療的手段之一[1]。但當(dāng)前獲得的抗CD133抗體,包括AC133、293C3和AC141等主要用于鑒
【相似文獻(xiàn)】
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,本文編號(hào):855046
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