本文關(guān)鍵詞：重組腺病毒介導(dǎo)BMP-9及促紅細(xì)胞生成素雙基因共轉(zhuǎn)染促進(jìn)脂肪來源干細(xì)胞體外成骨的研究

  更多相關(guān)文章： 脂肪來源干細(xì)胞 重組腺病毒 BMP- 促紅細(xì)胞生成素 成骨分化 兔

【摘要】：目的探討重組腺病毒介導(dǎo)BMP-9及促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,EPO)雙基因共轉(zhuǎn)染對(duì)脂肪來源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)體外成骨分化的影響。方法取4月齡新西蘭兔腹股溝脂肪組織,采用酶消化法與貼壁法分離培養(yǎng)ADSCs并鑒定其多向分化能力。將第3代ADSCs分為5組:A組為正常細(xì)胞,B組為空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為對(duì)照,C、D組分別采用BMP-9、EPO重組腺病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,E組采用BMP-9、EPO重組腺病毒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。轉(zhuǎn)染培養(yǎng)7 d后倒置相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞生長(zhǎng)變化;計(jì)算48 h時(shí)病毒轉(zhuǎn)染效率,14 d熒光顯微鏡下觀察各組細(xì)胞熒光表達(dá)情況;14 d時(shí)Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞BMP-9及EPO蛋白表達(dá)。取轉(zhuǎn)染培養(yǎng)14 d的5組細(xì)胞進(jìn)行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng),于誘導(dǎo)培養(yǎng)3、7、14 d檢測(cè)各組細(xì)胞ALP活性;3周時(shí)茜素紅染色觀察鈣結(jié)節(jié)形成情況,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)骨橋蛋白(osteopontin,OPN)、骨鈣素(osteocalcin,OCN)基因表達(dá)。結(jié)果轉(zhuǎn)染培養(yǎng)7 d后倒置相差顯微鏡下見A、B組部分細(xì)胞變?yōu)闄E圓形、圓形和不規(guī)則形;C、D組可見少量長(zhǎng)梭形細(xì)胞;E組長(zhǎng)梭形細(xì)胞明顯增多,僅見少量圓形細(xì)胞。熒光顯微鏡下觀察BMP-9、EPO及BMP-9/EPO重組腺病毒均能穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ADSCs,轉(zhuǎn)染效率為80%~93%。Western blot檢測(cè)示E組BMP-9及EPO蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3、7、14 d時(shí)各組細(xì)胞ALP活性明顯升高,E組優(yōu)于其余各組(P0.05);3周時(shí)茜素紅染色示E組鈣結(jié)節(jié)數(shù)亦顯著高于其余各組(P0.05),實(shí)時(shí)熒光定量PCR示E組OPN和OCN基因相對(duì)表達(dá)量明顯高于其他組,C、D組高于A、B組,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論重組腺病毒介導(dǎo)BMP-9及EPO基因均可轉(zhuǎn)染ADSCs并穩(wěn)定表達(dá),雙基因共轉(zhuǎn)染后能顯著促進(jìn)成骨相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)。
【作者單位】： 山東濟(jì)寧口腔醫(yī)院口腔頜面外科;山東濟(jì)寧口腔醫(yī)院口腔修復(fù)科;四川大學(xué)華西口腔醫(yī)院頜面外科;上海閔行區(qū)牙病防治所口腔外科;
【關(guān)鍵詞】： 脂肪來源干細(xì)胞 重組腺病毒 BMP- 促紅細(xì)胞生成素 成骨分化 兔
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81170935)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 脂肪來源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,AD SCs)因具有自我更新、多向分化和低免疫原性等優(yōu)勢(shì),成為組織工程研究熱點(diǎn)[1-2]。BMP-9是TGF-β家族成員之一,能夠調(diào)節(jié)干細(xì)胞向骨、軟骨、肌腱和脂肪等組織的分化[3-5]。促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,EPO)是一種低氧誘導(dǎo)激素,

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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4 趙艷芳;宋濤;劉躍亮;羅進(jìn)勇;;RUNX2對(duì)BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2成骨分化的影響[J];中國(guó)生物工程雜志;2013年02期

5 徐靜;趙丹;王箭;王文娟;羅進(jìn)勇;;骨形態(tài)發(fā)生蛋白9通過JNKs激酶途徑調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2013年12期

6 宋濤;劉躍亮;趙艷芳;王文娟;徐靜;羅進(jìn)勇;;cAMP-PKA-CREB信號(hào)通路在骨形態(tài)發(fā)生蛋白9誘導(dǎo)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中的作用[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2014年02期

7 李寶林;白慧麗;張汝益;嚴(yán)樹涓;何方;楊丹丹;劉晨;施瓊;;miR-30a抑制BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2的成骨分化[J];中國(guó)生物工程雜志;2013年11期

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【相似文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號(hào)：839452