本文關(guān)鍵詞：裝載戊型肝炎病毒核酸片段的重組MS2噬菌體衣殼的制備及其特性研究

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【摘要】：為制備一種可以實(shí)際應(yīng)用于戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)核酸檢測的質(zhì)控品,即裝載戊型肝炎病毒核酸片段的重組MS2噬菌體衣殼(rHEPC)。根據(jù)裝甲RNA技術(shù)原理,設(shè)計(jì)將MS2噬菌體基因組的5’端部分非編碼區(qū)、成熟酶蛋白、衣殼蛋白以及部分復(fù)制酶起始位點(diǎn)等編碼基因與HEV ORF2保守區(qū)部分基因序列串聯(lián)并合成目標(biāo)基因MS2-HEV。隨后將MS2-HEV基因克隆、插入原核表達(dá)載體pET-28b中構(gòu)建pET-28b-MS2/HEV重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3),經(jīng)過1mM/L IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)4h后,SDS-PAGE鑒定表達(dá)情況;將驗(yàn)證的表達(dá)菌體超聲破碎、離心、取上清、去除核酸雜質(zhì)后再經(jīng)超濾離心純化、濃縮,電鏡分析回收濃縮的rHEPC形態(tài);梯度稀釋rHEPC進(jìn)行穩(wěn)定性鑒定包括DNase I、RNase A抗性以及保存期三方面的穩(wěn)定性試驗(yàn)檢測。SDS-PAGE分析結(jié)果表明重組MS2-HEV基因獲得有效表達(dá),重組rHEPC純度高無雜帶;RT-PCR鑒定結(jié)果表明設(shè)計(jì)的HEV保守基因序列成功地被包裝到重組rHEPC中。進(jìn)一步的病毒顆粒穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明制備的rHEPC能夠有效抵抗高濃度的DNase I和RNase A的降解作用,并且在-20℃條件下可以持續(xù)保存7個(gè)月而無明顯降解。上述結(jié)果表明制備的rHEPC達(dá)到了作為RNA病毒核酸檢測陽性質(zhì)控品的基本要求。
【作者單位】： 錦州醫(yī)科大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 戊型肝炎病毒 MS噬菌體衣殼 裝甲RNA技術(shù)
【基金】：遼寧省自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號:2014022054;2014022049)
【分類號】：R373.21
【正文快照】： 戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是一種無囊膜的單股正鏈RNA病毒,基因組全長7.2-7.5kb,全基因組含有3個(gè)互相重疊開放讀碼框架ORF1、ORF2和ORF3[1,2,3]。ORF1主要編碼與病毒RNA有關(guān)的非結(jié)構(gòu)蛋白,ORF2主要編碼衣殼蛋白,ORF3主要編碼一種磷酸化的小蛋白[4,5]。其中,ORF2的保，

本文編號：838632