本文關(guān)鍵詞：嵌合γδ TCR結(jié)構(gòu)域的αβ TCR分子的同源建模及真核表達

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【摘要】：目的設(shè)計并構(gòu)建嵌合γδTCR類免疫球蛋白(Ig)結(jié)構(gòu)域的αβTCR分子,并在Jurkat T細胞中觀察其表達。方法通過生物信息學(xué)分析確定TCR△Ig分子的融合位點;應(yīng)用同源建模模擬嵌合TCRα和TCRβ蛋白的三維結(jié)構(gòu),并應(yīng)用組合擴展方法(CE)對TCR△Ig分子與野生型TCR分子的蛋白骨架以及抗原識別活性部位進行空間結(jié)構(gòu)比對和分析。采用重疊PCR法分別在TCRα△Ig和TCRβ△Ig的末端融合增強型青色熒光蛋白(ECFP)和增強型黃色熒光蛋白(EYFP),并分別克隆入質(zhì)粒p IRES2-EGFP內(nèi)部核糖體進入位點(IRES)的上下游。最后將重組表達質(zhì)粒p IRES-TCRβ△Ig-EYFP/TCRα△Ig-ECFP轉(zhuǎn)染Jurkat T細胞,共聚焦顯微鏡掃描分析該嵌合TCR分子的表達。結(jié)果 TCRα△Ig和TCRβ△Ig的同源建模及三維結(jié)構(gòu)比對結(jié)果顯示,相比于野生型TCR,該嵌合TCR的可變區(qū)(V)結(jié)構(gòu)無改變并且抗原識別活性中心結(jié)構(gòu)保持穩(wěn)定。重組表達質(zhì)粒經(jīng)PCR鑒定及測序分析證明載體構(gòu)建成功;并且共聚焦顯微鏡掃描結(jié)果顯示嵌合TCR分子能定位于T細胞膜表面并正常表達。結(jié)論該嵌合TCR分子設(shè)計合理,能在Jurkat T細胞表面正常表達。
【作者單位】： 廣東藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院廣東省生物技術(shù)候選藥物研究重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： T細胞受體 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測 同源建模 融合基因
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31300737)
【分類號】：R392
【正文快照】： T細胞受體(T cell receptor,TCR)是T細胞表面能夠識別和結(jié)合蛋白質(zhì)抗原的特異性受體,在細胞免疫中發(fā)揮著重要的靶向性作用[1],TCR基因修飾的T細胞過繼性免疫治療顯示了十分廣闊的應(yīng)用前景[2]。但由于外源TCR導(dǎo)入T細胞時,外源TCRα或β鏈與內(nèi)源TCRβ或α鏈之間會相互識別配對形

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本文編號：838054