發(fā)布時(shí)間：2017-09-10 00:27

  本文關(guān)鍵詞：RIK蛋白的重組表達(dá)、多克隆抗體制備及其功能的初步研究

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【摘要】：目的本研究從MHV68轉(zhuǎn)化得到的小鼠B淋巴瘤細(xì)胞中篩選出一種功能尚未明確的蛋白質(zhì),暫時(shí)命名為RIK。通過(guò)對(duì)RIK基因克隆、表達(dá)和純化并成功制備其多克隆抗體,并初步探討其生物學(xué)功能,為該蛋白的進(jìn)一步深入研究奠定基礎(chǔ)。方法通過(guò)RT-PCR的方法檢測(cè)B淋巴瘤細(xì)胞系和原代B細(xì)胞中的RIK m RNA水平,并擴(kuò)增出RIK的基因片段,采用基因重組技術(shù)構(gòu)建出RIK的原核表達(dá)載體,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后,利用鎳離子柱親和純化出RIK重組蛋白,免疫新西蘭大耳兔,制備抗RIK多克隆抗體,ELISA和Western blot檢測(cè)抗體靈敏度和特異性。最后,通過(guò)在過(guò)表達(dá)鼠源RIK的小鼠NIH3T12細(xì)胞中,進(jìn)行MHV68病毒感染實(shí)驗(yàn),初步確定其生物學(xué)功能。結(jié)果 RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)RIK在B淋巴瘤細(xì)胞系中m RNA水平高于原代B細(xì)胞,并且成功構(gòu)建人源和鼠源重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a(+)-h/m RIK,實(shí)現(xiàn)包涵體形式RIK蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)純化和抗體制備,SDS-PAGE和Western blot證實(shí)獲得的抗RIK多克隆抗體與預(yù)期結(jié)果一致,能夠特異地識(shí)別RIK蛋白。同時(shí),研究發(fā)現(xiàn),在小鼠NIH3T12細(xì)胞中過(guò)表達(dá)m RIK蛋白,能夠有效的抑制MHV68對(duì)該細(xì)胞的感染。結(jié)論本研究成功實(shí)現(xiàn)了RIK的重組表達(dá)、抗體制備,并且發(fā)現(xiàn)RIK蛋白對(duì)于MHV68的感染具有十分有效的抑制作用,實(shí)現(xiàn)了對(duì)其功能的初步研究,并且為深入研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;中國(guó)科學(xué)院上海巴斯德研究所;
【關(guān)鍵詞】： RIK RT-PCR 重組表達(dá) 多克隆抗體 MHV感染
【分類(lèi)號(hào)】：R392.11
【正文快照】： gamma型皰疹病毒是一種雙鏈DNA病毒,其成員遍及自然界,可感染包括人在內(nèi)的多種哺乳動(dòng)物,目前較為常見(jiàn)的病毒有感染人的EBV、KSHV、感染小鼠的MHV68 等。gamma型皰疹病毒的生物學(xué)特性主要包括:能在淋巴細(xì)胞中潛伏感染,可以產(chǎn)生淋巴增生性疾病,與淋巴組織和非淋巴組織腫瘤關(guān)系密

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