本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲熱休克因子基因結(jié)構(gòu)特征及其可變剪切亞型分析研究

  更多相關(guān)文章： 日本血吸蟲 熱休克反應(yīng) 熱休克因子 可變剪切 熱休克蛋白

【摘要】：目的克隆、鑒定日本血吸蟲熱休克因子(Sj-hsf),并分析其基因結(jié)構(gòu)特征和可變剪切亞型。方法以日本血吸蟲尾蚴感染新西蘭白兔,42 d后剖殺,以灌注法收集雌蟲、雄蟲及感染兔肝臟,以Trizol法提取總RNA。以RT-PCR擴(kuò)增日本血吸蟲雌蟲、雄蟲、蟲卵總RNA,獲得Sj-hsf開(kāi)放閱讀框(ORF)全長(zhǎng)片段和Sj-hsf可變剪切區(qū)域片段,并進(jìn)行克隆、酶切及測(cè)序鑒定。用DNAMAN 8.0、Inter Pro、Mega 6結(jié)合日本血吸蟲和曼氏血吸蟲基因組數(shù)據(jù)庫(kù)以及Gen Bank等網(wǎng)絡(luò)分析平臺(tái),分析Sj-hsf的基因結(jié)構(gòu)特征、功能結(jié)構(gòu)域、可變剪切模式以及不同物種間HSF序列的同源性和進(jìn)化樹(shù)。結(jié)果自雌蟲、雄蟲、蟲卵擴(kuò)增獲得靶片段,并克隆獲得陽(yáng)性重組質(zhì)粒,其中含Sj-hsf ORF的p BSj HSFf-F、p BSj HSFf-M、p BSj HSFf-E以及含可變剪切片段的p BSj HSFs-F、p BSj HSFs-M、p BSj HSFs-E,酶切及測(cè)序鑒定正確。序列分析顯示Sj-hsf具有3種剪切亞型:Sj-hsf-isoform1(2 050 bp)、Sj-hsf-isoform2(2 086 bp)、Sj-hsf-isoform3(2 111 bp),Gen Bank登錄號(hào)分別為KU954546、KX119143、KX119144,均位于日本血吸蟲基因組SJC-S000780,有8個(gè)外顯子,在雌蟲、雄蟲和蟲卵階段3種亞型均存在,以Sj-hsf-isoform1表達(dá)量高。Sj-HSF-isoform1(671 aa)、Sj-HSF-isoform2(683 aa)具有HSF特征性DBD(DNA Binding Domain)、HR-A/B和HR-C結(jié)構(gòu)域,Sj-HSF-isoform3(282 aa)提前終止,無(wú)HR-C結(jié)構(gòu)域。進(jìn)化樹(shù)分析表明Sj-HSF三種剪切亞型隸屬HSF1,與曼氏血吸蟲HSF近源。結(jié)論日本血吸蟲雌蟲、雄蟲、蟲卵階段均存在3種剪切亞型的HSF,以Sj-HSF-isoform1表達(dá)量高。本研究為進(jìn)一步闡明Sj-HSF調(diào)控Sj-HSPs等應(yīng)激防御體系的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院病原生物學(xué)系暨廣東普通高校新發(fā)傳染病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 日本血吸蟲 熱休克反應(yīng) 熱休克因子 可變剪切 熱休克蛋白
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81071378、30872204) 廣東省廣州市對(duì)外科技合作專項(xiàng)(2012J5100026) 廣東省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201412121088)
【分類號(hào)】：R383.24
【正文快照】： 生物體受外界各種刺激,會(huì)引發(fā)一系列防御性反應(yīng),其中熱休克反應(yīng)(Heat stress response,HSR)在此應(yīng)激防御過(guò)程中發(fā)揮重要作用。HSR體系包括感應(yīng)系統(tǒng)和效應(yīng)系統(tǒng),感應(yīng)系統(tǒng)包括細(xì)胞膜上鈣離子通道激活和下游通路如ROS通路(ROS/redox signaling network)和MAPK通路激活,繼而可引起

【相似文獻(xiàn)】

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