本文關(guān)鍵詞：一株鼠毒素基因缺失突變鼠疫耶爾森氏菌株的構(gòu)建和鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建鼠疫耶爾森氏桿菌減毒疫苗株鼠毒素基因缺失的突變菌株,建立鼠疫耶爾森氏桿菌的基因敲除方法,為研究鼠疫耶爾森氏桿菌基因奠定基礎(chǔ)。方法選擇1株鼠疫耶爾森氏桿菌減毒疫苗株(菌株號(hào)為0614F)為實(shí)驗(yàn)菌株。利用Artemis軟件閱讀鼠疫菌91001株基因序列,查找并導(dǎo)出鼠毒素(Ymt)及其兩側(cè)100個(gè)基因序列。設(shè)計(jì)同源區(qū)突變盒引物和鑒定引物,采用λ-Red系統(tǒng)一步法敲除0614F鼠毒素編碼基因并進(jìn)行鑒定。結(jié)果質(zhì)粒提取試劑盒提取Escherichia coli DH5α培養(yǎng)物pKD46質(zhì)粒50μl,濃度為121.1ng/μl;同源區(qū)突變盒引物擴(kuò)增含有氯霉素抗性基因菌株DNA,PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖電泳凝膠電泳鑒定后切膠,用膠回收試劑盒提取氯霉素線性突變盒50μl,濃度為724ng/μl;0614F菌株經(jīng)兩次電轉(zhuǎn)化獲得具有氨芐青霉素和氯霉素抗性的菌株,用相應(yīng)鑒定引物進(jìn)行PCR鑒定,獲得菌株鑒定為鼠毒素基因缺失株0614F-△Ymt。結(jié)論應(yīng)用基因敲除技術(shù)對(duì)鼠疫耶爾森氏桿菌鼠毒素基因定向突變成功,為青藏高原型鼠疫菌株新型疫苗研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 青海省地方病預(yù)防控制所青海省鼠疫防控與研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;青海省地方病預(yù)防控制所地方病預(yù)防控制科;
【關(guān)鍵詞】： 鼠疫耶爾森氏桿菌 鼠毒素 基因敲除
【基金】：青海省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2013-Z-906)
【分類號(hào)】：R378.61
【正文快照】： *?**?青海省是全國(guó)甚至全球鼠疫的高發(fā)地,鼠疫自然疫源地長(zhǎng)期存在且復(fù)雜而活躍,動(dòng)物間鼠疫流行猛烈,時(shí)常波及人類,進(jìn)入21世紀(jì)后的15年內(nèi)就發(fā)生了人間鼠疫13起,發(fā)病37人,死亡16人,1954-2012***年分離的鼠疫菌中93.26%為強(qiáng)毒株[1]。青海地區(qū)鼠疫具有發(fā)病急、病程短、鼠疫菌的毒

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王光明;;鼠疫菌鼠毒素在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)上的免疫活性[J];地方病譯叢;1981年04期

2 王洪喜;;111鼠毒素中毒的大白鼠體內(nèi)環(huán)狀核苷酸、前列腺素含量以及血小板聚集[J];地方病譯叢;1992年04期

3 王獻(xiàn)德;;鼠疫菌莢膜抗原、鼠毒素和內(nèi)毒素的結(jié)構(gòu)——功能特性和生物學(xué)活性[J];地方病譯叢;1988年03期

4 雷剛,熱娜·吐爾地,楚定成,阿扎提·熱合木,徐秉臣;鼠疫菌弱毒株粗制鼠毒素含量及其SDS-PAGE電泳圖形比較[J];地方病通報(bào);1997年02期

5 ;[J];;年期

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本文編號(hào)：820994