本文關(guān)鍵詞：IL-33調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞抗金黃色葡萄球菌感染的作用研究

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【摘要】：金黃色葡萄球菌是最常見的化膿性球菌,是引起全球院內(nèi)感染的重要致病菌。近年來,由于抗生素的濫用,導(dǎo)致多重耐藥性金黃色葡萄球菌產(chǎn)生,其致病性不斷提高,病死率逐年增加。中性粒細(xì)胞作為機(jī)體固有免疫系統(tǒng)的重要成員,處于機(jī)體抵抗病原微生物入侵,特別是化膿性細(xì)菌感染的第一道防線。IL-33是近年來發(fā)現(xiàn)的一種具有多種生物學(xué)功能活性的細(xì)胞因子,在感染性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。本課題擬建立多重耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)感染小鼠模型,研究IL-33在抗感染免疫中的調(diào)節(jié)作用,并探討其相關(guān)的免疫學(xué)機(jī)制,為臨床上治療MRSA感染提供新的思路和方向。研究目的:觀察IL-33在小鼠MRSA感染模型中的免疫調(diào)節(jié)作用,并探討其在抗感染免疫中相關(guān)機(jī)制;同時結(jié)合體外實(shí)驗,進(jìn)一步研究IL-33對中性粒細(xì)胞殺菌機(jī)制的影響,可望闡明抗感染免疫機(jī)制及防治多重耐藥菌感染提供新的實(shí)驗依據(jù)。研究方法:建立MRSA感染小鼠腹腔與皮膚兩種模型,通過給予外源性IL-33處理,觀察小鼠死亡率及感染傷口的愈合時間和愈合率,初步判斷IL-33的治療效果。取腹腔感染小鼠血液和腹腔液檢測中性粒細(xì)胞數(shù)目變化,細(xì)胞因子水平及細(xì)菌分布情況;感染皮膚組織固定切片,組織病理學(xué)分析,觀察傷口局部新生血管與肉芽組織生成、細(xì)菌的負(fù)荷量及皮膚感染部位NETs形成。流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光檢測IL-33調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的殺菌機(jī)制。研究結(jié)果:1.IL-33對MRSA腹腔感染的保護(hù)作用建立小鼠腹腔感染模型,經(jīng)IL-33治療后,小鼠的攝食量明顯改善,活動增多,反應(yīng)也較靈敏,小鼠存活率明顯增高;外周血及腹腔液中性粒細(xì)胞數(shù)目升高;外周血、腹腔液及臟器中細(xì)菌負(fù)荷量降低;同時炎性細(xì)胞因子IL-6、IL-17A和TNF-α水平升高。2.IL-33對MRSA皮膚感染的保護(hù)作用建立小鼠皮膚感染模型,經(jīng)IL-33治療后,皮膚膿腫愈合時間縮短為14天,感染皮膚組織細(xì)菌負(fù)荷量減少,膿腫部位NETs生成增多。3.IL-33對中性粒細(xì)胞殺菌機(jī)制的影響IL-33預(yù)處理后,中性粒細(xì)胞的趨化、吞噬、殺傷功能增加;中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)和粘附分子表達(dá)增加;PI3K/AKT/m TOR信號通路活化增強(qiáng);促進(jìn)中性粒細(xì)胞的胞外誘捕網(wǎng)(NETs)生成。結(jié)論:IL-33通過多途徑調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞生物學(xué)活性,增強(qiáng)機(jī)體抗MRSA感染的免疫功能。
【關(guān)鍵詞】：IL-33 耐藥性金黃色葡萄球菌 中性粒細(xì)胞 中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 第一章 序言11-14
• 第二章 IL-33 免疫調(diào)節(jié)MRSA腹腔感染的作用14-25
• 2.1 前言14
• 2.2 實(shí)驗材料14-16
• 2.2.1 主要實(shí)驗材料14
• 2.2.2 主要試劑14-15
• 2.2.3 主要儀器設(shè)備15
• 2.2.4 主要溶液配制15-16
• 2.3 實(shí)驗方法16-19
• 2.3.1 金黃色葡萄球菌（MRSA）的培養(yǎng)16
• 2.3.2 腹腔感染模型的建立16
• 2.3.3 IL-33 處理16
• 2.3.4 小鼠死亡曲線16-17
• 2.3.5 感染后小鼠的處理17-18
• 2.3.6 ELISA檢測炎性細(xì)胞因子表達(dá)18-19
• 2.3.7 IL-33 在中性粒細(xì)胞清除后腹腔感染中的作用19
• 2.3.8 統(tǒng)計分析19
• 2.4 實(shí)驗結(jié)果19-23
• 2.4.1 小鼠存活率變化19-20
• 2.4.2 血液、腹腔液及臟器細(xì)菌負(fù)荷量20-21
• 2.4.3 血液與腹腔液中性粒細(xì)胞數(shù)目21
• 2.4.4 外周血及腹腔液中炎性細(xì)胞因子的表達(dá)21-22
• 2.4.5 IL-33 免疫調(diào)節(jié)呈中性粒細(xì)胞依賴性22-23
• 2.5 討論23-25
• 第三章 IL-33 對中性粒細(xì)胞功能的影響25-38
• 3.1 前言25
• 3.2 實(shí)驗材料25-27
• 3.2.1 主要實(shí)驗材料25
• 3.2.2 主要試劑25-26
• 3.2.3 主要儀器設(shè)備26
• 3.2.4 主要溶液配制26-27
• 3.3 實(shí)驗方法27-32
• 3.3.1 金黃色葡萄球菌（MRSA）的培養(yǎng)（同第二章）27
• 3.3.2 中性粒細(xì)胞分離（不連續(xù)的密度梯度骨髓- Percoll離心法）27-28
• 3.3.3 Transwell檢測中性粒細(xì)胞趨化功能28
• 3.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測中性粒細(xì)胞吞噬功能28-29
• 3.3.5 溶細(xì)胞法檢測中性粒細(xì)胞的殺菌功能29
• 3.3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測中性粒細(xì)胞趨化因子CXCR2 或粘附分子CD11b的表達(dá)29-30
• 3.3.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測中性粒細(xì)胞的呼吸爆發(fā)30
• 3.3.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測p-AKT和p-mTOR表達(dá)30-31
• 3.3.9 mTOR信號對中性粒細(xì)胞殺菌功能的影響31-32
• 3.3.10 統(tǒng)計分析32
• 3.4 實(shí)驗結(jié)果32-36
• 3.4.1 IL-33 對中性粒細(xì)胞趨化功能的影響32-33
• 3.4.2 IL-33 對中性粒細(xì)胞吞噬功能的影響33
• 3.4.3 IL-33 對中性粒細(xì)胞殺菌功能的影響33-34
• 3.4.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-33 對中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)的影響34
• 3.4.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-33 對中性粒細(xì)胞粘附分子CD11b表達(dá)的影響34-35
• 3.4.6 mTOR信號調(diào)控中性粒細(xì)胞殺菌35-36
• 3.5 討論36-38
• 第四章 IL-33 參與抗MRSA皮膚感染的作用38-49
• 4.1 前言38
• 4.2 實(shí)驗材料38-40
• 4.2.1 主要實(shí)驗材料38
• 4.2.2 主要試劑38-39
• 4.2.3 主要儀器設(shè)備39
• 4.2.4 主要溶液配制39-40
• 4.3 實(shí)驗方法40-44
• 4.3.1 皮膚感染模型建立40
• 4.3.2 給藥方法40
• 4.3.3 組織切片HE染色、革蘭氏染色和免疫組織化學(xué)40-42
• 4.3.4 小鼠皮膚膿腫部位IL-33 的表達(dá)42-43
• 4.3.5 統(tǒng)計分析43-44
• 4.4 實(shí)驗結(jié)果44-48
• 4.4.1 小鼠皮膚膿腫部位IL-33 的表達(dá)44
• 4.4.2 小鼠背部皮膚膿腫潰爛面積和愈合時間44-45
• 4.4.3 傷口組織切片HE染色、革蘭氏染色45-47
• 4.4.4 小鼠皮膚感染傷口局部NETs的形成47-48
• 4.5 討論48-49
• 第五章 IL-33 調(diào)控中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)（NETs）殺菌作用49-60
• 5.1 前言49
• 5.2 實(shí)驗材料49-51
• 5.2.1 主要實(shí)驗材料49
• 5.2.2 主要試劑49
• 5.2.3 主要儀器設(shè)備49-50
• 5.2.4 主要溶液配制50-51
• 5.3 實(shí)驗方法51-54
• 5.3.1 金黃色葡萄球菌（MRSA）的培養(yǎng)（同第二章）51
• 5.3.2 中性粒細(xì)胞分離（同第三章）51
• 5.3.3 MRSA促進(jìn)中性粒細(xì)胞表達(dá)IL-3351
• 5.3.4 不同濃度的IL-33 對MRSA誘導(dǎo)NETs生成和殺菌率的影響51-52
• 5.3.5 檢測無NETs作用下，IL-33 對MRSA誘導(dǎo)NETs生成和殺菌率的影響52-53
• 5.3.6 檢測ROS被抑制時，IL-33 對MRSA誘導(dǎo)NETs生成和殺菌率的影響53-54
• 5.3.7 NETs免疫熒光染色54
• 5.3.8 統(tǒng)計分析54
• 5.4 實(shí)驗結(jié)果54-58
• 5.4.1 MRSA促進(jìn)中性粒細(xì)胞表達(dá)IL-3354-55
• 5.4.2 IL-33 對MRSA誘導(dǎo)NETs生成和殺菌率的影響55-56
• 5.4.3 DNA酶（DNaseⅠ）對NETs生成和殺菌率的影響56-57
• 5.4.4 ROS抑制劑（DPI）對NETs生成和殺菌率的影響57-58
• 5.5 討論58-60
• 全文總結(jié)60-61
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 已發(fā)表綜述65-74
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 附錄1 英文縮寫語中文對照74-76
• 附錄2 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文76-77
• 致謝77

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 許姣;劉超;鄭金旭;吳立艷;朱勤;;IL-33在肺纖維化小鼠的表達(dá)[J];江蘇醫(yī)藥;2013年04期

，

本文編號：804914