本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲ME49株AP核酸內(nèi)切酶的原核表達及其多克隆抗體的制備

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【摘要】：目的原核表達、純化剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)ME49株AP核酸內(nèi)切酶,并制備多克隆抗體。方法采用PCR方法擴增出剛地弓形蟲ME49株DNA TGME49-216600(681bp)基因。將該片段分別插入到pET-28a和pGEX-4T-1中,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET-28a-TGME49-216600和pGEX-4T-1-TGME49-216600并測序,轉(zhuǎn)入大腸埃希菌BL21-CodonPlus后用IPTG誘導(dǎo)表達重組蛋白質(zhì)。用His標簽重組蛋白質(zhì)免疫家兔,制備多克隆抗體,采用間接ELISA方法檢測抗體效價;采用Western blot方法分析抗體特異性。結(jié)果 SDS-PAGE分析表達的His標簽重組蛋白質(zhì)分子質(zhì)量單位約為35ku,GST標簽重組蛋白質(zhì)分子質(zhì)量單位約為55ku。間接ELISA方法檢測制備的兔抗His標簽重組蛋白抗體效價1∶16 000,Western blot方法驗證顯示該抗體能識別天然AP核酸內(nèi)切酶。結(jié)論成功構(gòu)建了TGME49-216600的表達載體,制備的多克隆抗體具有特異性,為剛地弓形蟲ME49株AP核酸內(nèi)切酶功能的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林大學(xué)人獸共患病研究所;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 AP核酸內(nèi)切酶 原核表達 多克隆抗體
【分類號】：R382.5
【正文快照】： *剛地弓形蟲是一種頂復(fù)門寄生原蟲,可感染人和哺乳動物。剛地弓形蟲按其毒力的不同可以分為3個蟲株:TypeⅠ、TypeⅡ和TypeⅢ。TypeⅡ為弱毒株,是人類感染主要蟲株類型,其中較為常見的是ME49株。剛地弓形蟲病是一種在世界范圍內(nèi)流行的典型的人獸共患病,約有1/3人感染[1]。健康，

本文編號：803797