本文關(guān)鍵詞：埃博拉病毒GP和VP40蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的共表達(dá)及病毒樣顆粒裝配

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【摘要】：目的:制備基因重組埃博拉病毒樣顆粒,為疫苗研究及埃博拉病毒特異抗原、抗體檢測(cè)提供基礎(chǔ)。方法:根據(jù)埃博拉病毒扎伊爾株的GP和VP40蛋白氨基酸序列,以哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因表達(dá)密碼子偏好性進(jìn)行基因優(yōu)化設(shè)計(jì);化學(xué)合成GP和VP40基因片段并分別構(gòu)建于表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1或同時(shí)構(gòu)建到具有雙表達(dá)單元的質(zhì)粒pBudCE4.1;重組質(zhì)粒經(jīng)lipofectamine2000轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞;以Western blot檢測(cè)重組蛋白GP和VP40的表達(dá);通過(guò)電鏡觀察病毒樣顆粒。結(jié)果:構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定及測(cè)序分析證實(shí)構(gòu)建成功;Western blot結(jié)果顯示,共轉(zhuǎn)染分別表達(dá)GP和VP40的兩個(gè)質(zhì)�；蜣D(zhuǎn)染共表達(dá)兩個(gè)蛋白的質(zhì)粒都發(fā)現(xiàn)GP特異反應(yīng)條帶產(chǎn)生,且大小與預(yù)期相符,此外,轉(zhuǎn)染共表達(dá)質(zhì)粒產(chǎn)生的GP蛋白表達(dá)明顯強(qiáng)于兩個(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,并同時(shí)可檢測(cè)到VP40的表達(dá);電鏡觀察到典型的絲狀的埃博拉病毒樣顆粒。結(jié)論:在293FT細(xì)胞中基因優(yōu)化的埃博拉病毒GP和VP40可有效表達(dá)并裝配為病毒樣顆粒,為進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué);中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院/北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所;云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;云南省重大傳染病疫苗工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 埃博拉病毒 病毒樣顆粒 FT細(xì)胞 表達(dá)
【基金】：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所所級(jí)科技計(jì)劃(2014IMB02ZD)對(duì)本研究的資助
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 埃博拉病毒感染可引起多發(fā)性器官衰竭等癥狀最終導(dǎo)致死亡[1],致死率高達(dá)70%~80%[2]。埃博拉病毒自1967年首次發(fā)現(xiàn)以來(lái)已引起多次爆發(fā)[3],最近一次發(fā)生于2014年,死亡人數(shù)高達(dá)7 373人。目前來(lái)看,埃博拉病毒感染存在一定地域限制性[4],但是由于其潛伏期通常為5~12天甚至可達(dá)21天,

【相似文獻(xiàn)】

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6 王，

本文編號(hào)：772010