本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的綠色熒光蛋白基因在日本血吸蟲體內(nèi)的表達(dá)和檢測

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【摘要】：目的驗證外源綠色熒光蛋白基因在日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)體內(nèi)能否成功表達(dá)并產(chǎn)生綠色熒光。方法采用熒光顯微鏡觀察日本血吸蟲不同蟲期蟲體的背景熒光情況。利用含有由巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動子驅(qū)動的綠色熒光蛋白zs Green基因的慢病毒載體感染體外培養(yǎng)的14 d童蟲,未感染對照組采用不含慢病毒的RPMI 1640培養(yǎng)液(含10%胎牛血清)培養(yǎng)。感染后48 h,提取童蟲基因組DNA和總RNA,合成c DNA,PCR檢測zs Green基因是否整合入基因組以及綠色熒光蛋白m RNA的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況。在感染后24和48 h,以及換為不含慢病毒的RPMI 1640培養(yǎng)液后的不同時間點,使用熒光顯微鏡觀察被感染童蟲發(fā)出的綠色熒光,并判斷其是否為綠色熒光蛋白基因在蟲體內(nèi)表達(dá)而產(chǎn)生的綠色熒光信號。結(jié)果熒光顯微鏡觀察可見,日本血吸蟲童蟲無明顯自發(fā)熒光現(xiàn)象,成蟲可自發(fā)明顯熒光。感染組童蟲基因組DNA和總c DNA PCR檢測結(jié)果顯示,均擴(kuò)增出大小為173 bp的陽性條帶,與zs Green基因片段一致,且測序結(jié)果正確。熒光顯微鏡觀察可見,而感染組童蟲在感染后24 h,腸道內(nèi)出現(xiàn)綠色熒光亮點,但疑似食物殘渣。感染后48 h,童蟲腸道發(fā)出均勻的綠色熒光,其亮度高于慢病毒培養(yǎng)液的背景熒光亮度。更換為不含慢病毒的RPMI 1640培養(yǎng)液3 d后,童蟲腸道內(nèi)綠色熒光變?nèi)?一周后綠色熒光消失。重新更換為含慢病毒的RPMI 1640培養(yǎng)液感染童蟲,2 d后在腸道內(nèi)再次發(fā)現(xiàn)均勻綠色熒光。未感染對照組童蟲未出現(xiàn)綠色熒光。結(jié)論外源綠色熒光蛋白可在日本血吸蟲體內(nèi)表達(dá),但熒光顯微鏡下觀察到的綠色熒光信號還有待進(jìn)一步確認(rèn)。
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物與微生物工程系;中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所 世界衛(wèi)生組織熱帶病合作中心 科技部國家級熱帶病國際聯(lián)合中心 衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學(xué)重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 日本血吸蟲 綠色熒光蛋白 慢病毒載體
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81271867) 國際科技合作與交流專項支持(No.2014DFA31130)~~
【分類號】：R383.24
【正文快照】： 近年來,日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)基因組和轉(zhuǎn)錄組全面測序已完成,并獲得了大量的基因數(shù)據(jù)[1,2]。利用反向遺傳學(xué)方法對日本血吸蟲進(jìn)行基因操縱,這些基因的生理功能是目前的研究熱點[3-5]。在曼氏血吸蟲(S.mansoni)中已證明,利用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染可以將外源基因?qū)胙?

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹玲;;我科學(xué)家公布日本血吸蟲“基因天書”[J];發(fā)明與創(chuàng)新(綜合版);2006年07期

2 ;抑制一種酶的活性可致日本血吸蟲死亡[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2012年04期

3 何毅勛,彭辛午;日本血吸蟲發(fā)育的掃描電鏡觀察[J];寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1983年04期

4 黃左鉞,勵正康,邱云,王琴美;呼吸在日本血吸蟲能量代謝中的作用[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1987年03期

5 張萍;;日本血吸蟲的采集、固定和保存法簡介[J];寄生蟲病防治與研究;1995年03期

6 帥連云,曹建平,仇錦波;日本血吸蟲純凈活蟲卵的制備[J];鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1998年04期

7 沈際佳,蔣作君,余新炳,汪淵,汪學(xué)龍,吳忠道,周青;日本血吸蟲線粒體大亞基核糖體基因的亞克隆、測序及同源性分析[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2000年04期

8 王文實,李雍龍;日本血吸蟲細(xì)胞凋亡及其誘導(dǎo)的研究[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2000年05期

9 吳忠道,余新炳,徐勁,曹愛蓮,羅建威,熊小燕,耿巖;日本血吸蟲細(xì)菌人工染色體文庫的初步構(gòu)建(英文)[J];廣東寄生蟲學(xué)會年報;2000年00期

10 卞國武,余新炳,吳忠道;日本血吸蟲(中國大陸株)成蟲表達(dá)序列標(biāo)簽的獲取及分析[J];廣東寄生蟲學(xué)會年報;2000年00期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 程國鋒;林矯矯;馮新港;傅志強(qiáng);苑純秀;周元聰;蔡幼民;;日本血吸蟲性別發(fā)育蛋白質(zhì)組研究[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)首屆學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2003年

2 王欣之;矯矯;石耀軍;馮新港;苑純秀;金亞美;;日本血吸蟲7d童蟲消減cDNA文庫的構(gòu)建及測序分析[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

3 沈際佳;蔣作君;余新炳;汪學(xué)龍;王維;;編碼日本血吸蟲10.6KD膜蛋白基因的克隆、測序及表達(dá)[A];中國動物學(xué)會第六屆全國青年寄生蟲學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

4 夏艷勛;林矯矯;趙傳壁;陳益;賀桂芬;;日本血吸蟲性別差異表達(dá)基因的篩選及研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

5 周立;榮秋亮;王業(yè)富;;日本血吸蟲熒光定量PCR檢測方法的建立[A];2012年湖北生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展高端論壇暨湖北省生物工程學(xué)會2012年度學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2012年

6 楊勝輝;劉碧源;劉彥;周東明;曾慶仁;曾鐵兵;喻容;蔡力汀;張順科;方會龍;;端粒酶催化亞單位基因經(jīng)雙嗜性逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入日本血吸蟲體外培養(yǎng)細(xì)胞的研究[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

7 葉向群;;釘螺體內(nèi)葉巢外睪吸蟲與日本血吸蟲對抗性的研究[A];中國動物學(xué)會第八次全國寄生蟲學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2001年

8 陸珂;苑純秀;朱傳剛;石耀軍;李浩;劉金明;林矯矯;;日本血吸蟲膜蛋白重組抗原免疫小鼠的保護(hù)力評估研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

9 孔娟;馮正;徐斌;鄧王平;鞠川;胡薇;;日本血吸蟲腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因的克隆、表達(dá)及各蟲期轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況的研究[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

10 徐斌;馮正;鞠川;許學(xué)年;莫筱謹(jǐn);鄧王平;孔娟;胡薇;;日本血吸蟲金屬蛋白酶基因的克隆和表達(dá)及其對小鼠的免疫保護(hù)性研究[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 記者 陳衛(wèi)東;日本血吸蟲基因組測序完成[N];科技日報;2009年

2 通訊員 彭振 記者 程守勤;抑制一種酶的活性可致日本血吸蟲死亡[N];健康報;2012年

3 記者　曹玲娟;我科學(xué)家公布日本血吸蟲“基因天書”[N];人民日報;2006年

4 記者　 章迪思 實習(xí)生 周惠婷;血吸蟲基因“天書”全球發(fā)布[N];解放日報;2006年

5 岳陽;國內(nèi)生物信息平臺首發(fā)大規(guī)模基因組數(shù)據(jù)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

6 記者　謝軍;我國首次向全球公布日本血吸蟲基因組工作框架圖序列數(shù)據(jù)[N];光明日報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉建;日本血吸蟲氧化還原相關(guān)蛋白功能、結(jié)構(gòu)及應(yīng)用研究[D];華東理工大學(xué);2012年

2 韓艷輝;硫氧還蛋白谷胱甘肽還原酶(TGR)在日本血吸蟲生長發(fā)育中部分功能的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 張玉梅;日本血吸蟲感染宿主濾泡輔助性T細(xì)胞變化及功能的研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2016年

4 朱麗慧;日本血吸蟲exosomes調(diào)控蟲體與宿主互作的功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

5 洪煬;日本血吸蟲童蟲在不同敏感性宿主體內(nèi)差異表達(dá)蛋白的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 劉昒;日本血吸蟲骨形成蛋白分子的鑒定和功能研究[D];武漢大學(xué);2013年

7 武闖;日本血吸蟲免疫球蛋白結(jié)合蛋白質(zhì)組的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

8 劉鋒;人CD34+造血干/祖細(xì)胞和日本血吸蟲的轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

9 何原;日本血吸蟲酚氧化酶基因結(jié)構(gòu)及其功能的研究[D];武漢大學(xué);2012年

10 徐靜瑋;日本血吸蟲抗原誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化的分子證據(jù)[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王宇清;感染日本血吸蟲引起宿主循環(huán)MicroRNAs表達(dá)變化的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 刀金威;日本血吸蟲凋亡抑制因子SjBIRP功能的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 劉艷濤;日本血吸蟲表膜蛋白SjOST48的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 馬帥;日本血吸蟲TOR基因克隆表達(dá)及生物學(xué)功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

5 趙登云;日本血吸蟲蟲卵及相關(guān)抗原的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

6 杜曉峰;日本血吸蟲入侵宿主過程中關(guān)鍵尾蚴蛋白酶的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 趙波;吡喹酮（PZQ）衍生物對日本血吸蟲PZQ抗性蟲體的生物學(xué)效應(yīng)及PZQ抗性蟲體蛋白質(zhì)組學(xué)分析[D];蘇州大學(xué);2015年

8 華夢晴;日本血吸蟲Nanos蛋白的基因定位與功能初步鑒定[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

9 邵延靖;日本血吸蟲Vasa3基因定位與功能的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 卞超蓉;日本血吸蟲不同蟲株的群體遺傳學(xué)分析[D];蘇州大學(xué);2015年

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