本文關(guān)鍵詞：產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌K99-987P-F41原核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及其純化

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【摘要】：目的構(gòu)建產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)后進(jìn)行純化。方法利用PCR技術(shù),從ETEC基因組DNA中擴(kuò)增出K99、987P、F41部分基因片段,將3段目的基因融合亞克隆至大腸埃希菌原核表達(dá)載體p ET30a(+),構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET30a(+)-K99-987P-F41,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)的重組蛋白經(jīng)鎳離子親和層析純化。結(jié)果重組表達(dá)質(zhì)粒p ET30a(+)-K99-987P-F41經(jīng)PCR、酶切及測序鑒定證明構(gòu)建正確。表達(dá)的重組蛋白相對分子質(zhì)量約60 000,主要以包涵體形式存在,表達(dá)量約占菌體總蛋白的63.8%,純度為81.2%,濃度為8.953 mg/ml,可同時被天然和重組抗原多抗識別,具有良好的反應(yīng)原性。結(jié)論 ETEC重組質(zhì)粒p ET30a(+)-K99-987P-F41可在大腸埃希菌BL21(DE3)中表達(dá),利用鎳離子親和層析柱純化可獲得融合蛋白。
【作者單位】： 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌 原核表達(dá) 純化
【基金】：黑龍江省農(nóng)墾總局攻關(guān)項(xiàng)目(HNK125B-11-02)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌(enterotoxigenic Esche-richia coli,ETEC)是犢牛腹瀉最重要的病原之一[1-2]。ETEC的毒力因子包括黏附素(也稱菌毛)和腸毒素。黏附素特異性地與宿主小腸黏膜上皮細(xì)胞的特異性受體結(jié)合,進(jìn)而定植于小腸黏膜,分泌腸毒素,使小腸黏膜細(xì)胞分泌功能增強(qiáng),吸收功

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本文編號：766991