本文關(guān)鍵詞：γ-氨基丁酸受體與小鼠卵母細(xì)胞成熟度的相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： γ-氨基丁酸(GABA) 受體 顆粒細(xì)胞 卵泡發(fā)育 小鼠

【摘要】：目的以性成熟前雌性小鼠卵巢上不同成熟度的顆粒細(xì)胞為研究對(duì)象,測(cè)定γ-氨基丁酸(GABA)及其A型受體在小鼠顆粒細(xì)胞上的表達(dá)水平,探討γ-氨基丁酸A型受體與小鼠卵母細(xì)胞成熟度的相關(guān)性。方法為刺激性成熟前雌性小鼠卵泡的生長(zhǎng),給予其腹腔內(nèi)注射孕馬血清促性腺激素(PMSG),并給予人絨毛膜促性腺激素(HCG)以誘發(fā)排卵,收集生發(fā)泡期(GV)和減數(shù)第2次分裂中期(MⅡ)卵母細(xì)胞周圍的顆粒細(xì)胞。采用q RT-PCR技術(shù),檢測(cè)γ-氨基丁酸A型受體各個(gè)亞單位在GV期和MⅡ期顆粒細(xì)胞上的基因表達(dá);采用Western blotting和組織免疫熒光技術(shù),檢測(cè)在GV期和MⅡ期顆粒細(xì)胞中A型受體α5亞基蛋白的表達(dá);采用免疫組織化學(xué)技術(shù),檢測(cè)GABA在GV期和MⅡ期顆粒細(xì)胞上的表達(dá)及分布。結(jié)果(1)γ-氨基丁酸A型受體中α3、α5、β3、π、θ、δ亞基m RNA,均在小鼠GV期和MⅡ期顆粒細(xì)胞中均有所表達(dá),其中α3、π、δ亞基m RNA在GV期顆粒細(xì)胞中的表達(dá)水平高于其MⅡ期,而β3、α5亞基在GV期的顆粒細(xì)胞中表達(dá)水平低于其MⅡ期,θ亞基在GV期和MⅡ期顆粒細(xì)胞上的表達(dá)幾乎沒(méi)有差異(P0.05)(2)A型受體α4亞基僅在小鼠GV期的顆粒細(xì)胞上有少量表達(dá),而在MⅡ期不表達(dá),其余的A型受體α1、α2、α6、β1、β2、γ1、γ2、γ3、ε亞單位在GV期和MⅡ期顆粒細(xì)胞中均不表達(dá)(3)A型受體α5亞基蛋白在小鼠GV期和MⅡ期顆粒細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá),且其表達(dá)量隨卵泡發(fā)育呈上調(diào)趨勢(shì)(P0.05)(4)根據(jù)免疫組化分析,在小鼠GV期和MⅡ期顆粒細(xì)胞胞質(zhì)中均可見(jiàn)GABA的分布。結(jié)論GABA及其A型受體亞單位表達(dá)于小鼠不同成熟度的顆粒細(xì)胞中,其中部分A型受體α3、α5、β3、π、δ亞單位的表達(dá)變化與卵母細(xì)胞的成熟度有相關(guān)性,提示其可能參與小鼠卵泡發(fā)育和成熟的過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：γ-氨基丁酸(GABA) 受體 顆粒細(xì)胞 卵泡發(fā)育 小鼠
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R321
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 引言5-7
• 第1章 實(shí)驗(yàn)材料7-10
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物7
• 1.2 主要試劑7
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器7-8
• 1.4 主要溶液及配方8-10
• 第2章 實(shí)驗(yàn)方法10-19
• 2.1 樣本收集10
• 2.2 GABAA受體亞單位基因表達(dá)的檢測(cè)10-14
• 2.2.1 總RNA的提取10-11
• 2.2.2 RNA的逆轉(zhuǎn)錄11-12
• 2.2.3 引物設(shè)計(jì)12-13
• 2.2.4 qRT-PCR反應(yīng)13-14
• 2.2.5 數(shù)據(jù)分析14
• 2.3 蛋白免疫印跡法14-17
• 2.3.1 蛋白提取14
• 2.3.2 蛋白測(cè)定與處理14-15
• 2.3.3 SDS-PAGE電泳15-16
• 2.3.4 免疫印跡雜交16-17
• 2.4 組織免疫熒光檢測(cè)17-18
• 2.4.1 石蠟切片制作17
• 2.4.2 組織免疫熒光17-18
• 2.5.免疫組織化學(xué)檢測(cè)18
• 2.5.1 石蠟包埋及脫蠟18
• 2.5.2 免疫組織化學(xué)18
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理18-19
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-30
• 3.1 GABA-A型受體亞單位在小鼠不同時(shí)期顆粒細(xì)胞上的基因表達(dá)19-28
• 3.2 免疫印跡法檢測(cè)α 5 蛋白在小鼠不同時(shí)期顆粒細(xì)胞上的表達(dá)28
• 3.3 組織免疫熒光技術(shù)檢測(cè) α5 蛋白在小鼠不同時(shí)期顆粒細(xì)胞上表達(dá)28-29
• 3.4 免疫組織化學(xué)定性檢測(cè)GABA在小鼠不同時(shí)期顆粒細(xì)胞上的表達(dá)29-30
• 第4章 討論30-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 綜述36-44
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果44-45
• 致謝45-46

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周志瑜;和一個(gè)發(fā)育中的牙釉質(zhì)器相聯(lián)系的顆粒細(xì)胞團(tuán)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè);1984年02期

2 鄭斐,呂時(shí)銘;白介素-6調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞雌孕激素分泌的作用[J];生殖與避孕;2001年02期

3 蘇小妹,張燕軍,劉鋒;大量前列腺巨嗜顆粒細(xì)胞1例[J];中國(guó)誤診學(xué)雜志;2003年09期

4 于寧昌;;人末梢單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生顆粒細(xì)胞趨化因子[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));1981年03期

5 余英豪，，鄭玉清，張連郁;37例顆粒細(xì)胞雪旺氏瘤臨床病理分析[J];實(shí)用癌癥雜志;1994年01期

6 蘇小妹,張燕軍,劉鋒;尿檢中發(fā)現(xiàn)多量一過(guò)性前列腺巨嗜顆粒細(xì)胞1例[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2003年06期

7 賈孟春;促性腺激素釋放激素高效類似物抑制人顆粒細(xì)胞分泌孕酮[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(計(jì)劃生育分冊(cè));1983年01期

8 ;口腔及頜骨內(nèi)顆粒細(xì)胞病損的臨床病理、免疫組化及超微結(jié)構(gòu)研究[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè);1990年04期

9 王春梅,劉桂蓮,吳紅;消抗靈對(duì)離體培養(yǎng)的大鼠顆粒細(xì)胞雌孕激素生成的影響[J];牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1999年03期

10 楊書(shū)紅;馬蘭芳;王世宣;;微小RNA在卵巢顆粒細(xì)胞中的研究進(jìn)展[J];中國(guó)婦幼保健;2014年16期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊雪;周從容;;胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ?qū)θ祟w粒細(xì)胞分泌功奶的影響[A];第二屆西部地區(qū)（12省區(qū)）婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

2 沈健;馮云;龍?chǎng)┣?喇端端;;顆粒細(xì)胞水平抑制素B的表達(dá)及其在女性生殖中的意義[A];首屆滬浙婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨2006年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

3 丁婷;羅愛(ài)月;楊書(shū)紅;賴志文;盧運(yùn)萍;馬丁;王世宣;;小鼠卵巢顆粒細(xì)胞不同分離方法的比較[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三次全國(guó)絕經(jīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨絕經(jīng)相關(guān)問(wèn)題學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

4 翁靜;諸定壽;;小鼠卵周圍顆粒細(xì)胞排卵后在輸卵管內(nèi)死亡過(guò)程的研究[A];第九次全國(guó)生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2003年

5 沈浣;;顆粒細(xì)胞與卵母細(xì)胞發(fā)育[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議�？痆C];2012年

6 王春生;李晶;張滕子;寧方勇;樸善花;安鐵洙;;擬蜘蛛絲蛋白基因在小鼠顆粒細(xì)胞中的整合及其鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 甄t熑

本文編號(hào)：748092