本文關(guān)鍵詞：分子伴侶幽門螺桿菌Hsp60與UreB的相互作用分析

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【摘要】：目的檢測(cè)并分析幽門螺桿菌(Hp)尿素酶β亞基(UreB)與Hsp60之間的相互作用。方法克隆Hp 26695的尿素酶β亞基基因(UreB)融合GST標(biāo)簽和Hsp60基因融合His標(biāo)簽,分別在大腸埃希菌中進(jìn)行異源表達(dá)。提取兩種蛋白,采用pull-down方法檢測(cè)兩者間的相互作用。利用Modeller 9v2軟件,以E.coli的GroEL為基礎(chǔ)模建Hp Hsp60的三維結(jié)構(gòu),再與已知的UreB結(jié)構(gòu)利用AutoDock 4.2軟件進(jìn)行分子共模擬,分析二者的相互作用面和關(guān)鍵氨基酸。結(jié)果構(gòu)建了Hp Hsp60和尿素酶β亞基(UreB)的大腸埃希菌異源表達(dá)體系并獲得純化蛋白;Pull-down試驗(yàn)顯示部分未融合GST標(biāo)簽的Hsp60出現(xiàn)在GST-UreB的洗脫液中,表明Hsp60與GST-UreB之間存在相互作用;以E.coli的GroEL為基礎(chǔ)模建了Hp Hsp60的三維結(jié)構(gòu),利用docking技術(shù)構(gòu)建UreB與Hp Hsp60的相互作用模型,發(fā)現(xiàn)其主要的相互作用面位于Hsp60的α9與UreB的α2之間,其可能形成氫鍵的關(guān)鍵位點(diǎn)為UreB的α2上的T147氨基酸與Hsp60的α9上的E237、K238。結(jié)論 Hp Hsp60能直接與尿素酶β亞基(UreB)相互作用,Hsp60可能通過這種相互作用在UreB成熟過程中發(fā)揮分子伴侶功能。這為闡明Hp尿素酶的組裝與成熟機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 濱州醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 幽門螺桿菌 尿素酶 Hsp 分子伴侶 相互作用
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(No.81501718) 山東省自然科學(xué)基金培養(yǎng)基金項(xiàng)目(No.ZR2015PC021、No.ZR2014CP020) 山東省高等學(xué)�？萍加�(jì)劃項(xiàng)目(No.J13LK16) 濱州醫(yī)學(xué)院科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.BY2014KJ01)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： *?**?幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)是目前所知的唯一一種能特異性寄居于人胃粘膜的病原菌,是胃腸道疾病的主要致病因素之一[1]。Hp產(chǎn)生的尿素酶是重要致病因子,由α、β兩亞基構(gòu)成。Hp對(duì)低pH十分敏感,但Hp分泌的尿素酶能水解尿素而釋放氨,從而中和鹽酸,使細(xì)菌能夠順利

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本文編號(hào)：677629