本文關鍵詞：分枝桿菌熱休克蛋白65重組質粒的構建與原核表達

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【摘要】：目的研究分枝桿菌熱休克蛋白65(HSP65)重組質粒的構建與原核表達。方法 HSP65的開放閱讀框經(jīng)聚合酶鏈反應(PCR)擴增后,經(jīng)NcoⅠ與NotⅠ內切酶依次酶切,連接至酶切后的原核表達載體PET-28a中,然后將重組質粒轉入大腸桿菌BL-21中,PCR篩選陽性克隆,并經(jīng)DNA測序進一步驗證。陽性克隆進一步擴大培養(yǎng),并進行乳糖誘導,十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳對菌體蛋白進行檢測。結果成功擴增出1 623 bp的目的片段HSP65;測序結果顯示,該片段與目的序列完全相符,重組子PET-28a/HSP65構建成功;乳糖誘導后的HSP65在大腸桿菌中實現(xiàn)高表達。結論分枝桿菌HSP65蛋白的成功表達,為研究其在抗腫瘤疫苗中的應用奠定了基礎。
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學院;新鄉(xiāng)醫(yī)學院生命科學技術學院;
【關鍵詞】： 熱休克蛋白 重組質粒 融合蛋白 原核表達 分枝桿菌
【基金】：全國大學生創(chuàng)新訓練項目(編號:201410472040)
【分類號】：R378.91
【正文快照】： 研究表明,腫瘤細胞能表達腫瘤相關抗原或腫瘤特異性抗原,機體免疫系統(tǒng)識別腫瘤抗原產(chǎn)生特異性免疫應答,引起效應細胞的啟動或釋放一系列效應分子,攻擊和清除腫瘤細胞或抑制腫瘤細胞生長[1]。腫瘤疫苗正是基于這一原理,采取主動免疫的方法誘導機體產(chǎn)生特異性免疫應答,以達到預

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