本文關(guān)鍵詞：惡性瘧原蟲(chóng)配子體期特異性蛋白Pfgdv1克隆表達(dá)及鑒定

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【摘要】：目的克隆惡性瘧原蟲(chóng)配子體期特異性基因(Plasmodium falciparum gametocyte development 1 gene,Pfgdv1),體外表達(dá)和鑒定重組Pfgdv1蛋白。方法通過(guò)PCR法從惡性瘧原蟲(chóng)感染病人血液DNA樣本中擴(kuò)增Pfgdv1基因,插入到原核表達(dá)載體p ET28a(+),構(gòu)建p ET28a-Pfgdv1重組表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),通過(guò)異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,經(jīng)Ni+-親和層析柱純化重組蛋白,純化產(chǎn)物經(jīng)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和Western blotting鑒定。結(jié)果 PCR擴(kuò)增的Pfgdv1基因長(zhǎng)度約為1.65 kb,重組p ET28a-Pfgdv1質(zhì)粒構(gòu)建成功,插入方向正確無(wú)框移,轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3+)所表達(dá)的重組蛋白分子量約為67 k Da,且能被抗His標(biāo)簽單克隆抗體識(shí)別。結(jié)論成功克隆了Pfgdv1基因,表達(dá)并純化了重組Pfgdv1蛋白,為進(jìn)一步研究惡性瘧原蟲(chóng)配子體期傳播阻斷疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室、安徽省感染與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 惡性瘧原蟲(chóng) Pfgdv 配子體 傳播阻斷疫苗 原核表達(dá)
【基金】：蚌埠醫(yī)學(xué)院研究生科研創(chuàng)新計(jì)劃資助項(xiàng)目(Byycx1402) 安徽省教育廳自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2012-A-200) 安徽省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(AH201410367046,AH201410367041) 國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201410367046,201410367041)
【分類(lèi)號(hào)】：R382.31
【正文快照】： 瘧疾是與艾滋病、結(jié)核并稱(chēng)為全球危害最為嚴(yán)重的疾病,是全球廣泛關(guān)注的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。據(jù)WHO報(bào)告,2014年全球大約有33億人口受到瘧疾感染威脅,12億人處于高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū);2013年新發(fā)病例 達(dá)1.98億,其中死亡人數(shù)達(dá)58.4萬(wàn)例[1]。近20年來(lái),我國(guó)瘧疾疫情得到很好控制,并在2010，

本文編號(hào)：641531