本文關(guān)鍵詞：兔肉芽組織增生性氣管狹窄模型的建立及探究不同冷凍消融時間對肉芽組織的影響

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【摘要】：目的：通過機械性損傷的方法誘導(dǎo)新西蘭兔氣管黏膜肉芽組織過度增生,形成氣管狹窄,建立肉芽組織增生性氣管狹窄的實驗動物模型。方法：1)選取24只體重在2.7-3.2kg范圍內(nèi)新西蘭大白兔,將其隨機分為模型A、B、C組和假手術(shù)A、B、C組,每組各4只；2)對模型組采用硬質(zhì)尼龍刷對氣管前壁進行均勻用力刷擦30次,假手術(shù)組則只進行氣管橫切,不予刷擦；3)根據(jù)分組的不同,模型組分別于刷擦后第7、10、13d取材,同期對假手術(shù)組取材,并對氣管大體標(biāo)本組織進行肉眼觀察；4)對標(biāo)本行HE染色,置入光學(xué)顯微鏡下觀察病理組織學(xué)變化。結(jié)果：(1)肉眼觀察：1)假手術(shù)組氣管橫截面處光滑,皇蒼白色,無肉芽組織增生,管腔通暢；2)模型組氣管橫截面處充血明顯,呈暗紅色,并可見不同程度的肉芽組織增生及管腔狹窄,且狹窄程度隨造模時間推移而增加。(2)病理組織學(xué)觀察：1)假手術(shù)組氣管黏膜上皮完整,模型組氣管黏膜上皮均有不同程度的脫落、缺失；2)模型組氣管黏膜下層(黏膜下至軟骨淺層之間的距離)厚度有隨著造模時間推移而逐漸呈增大趨勢,且均明顯厚于假手術(shù)組；3)造模后第7d,模型A組中可見少量新生毛細血管；造模后第10d,模型B組中可見大量新生毛細血管形成；造模后第13d,模型C組中毛細血管出現(xiàn)閉塞、減少。結(jié)論：硬質(zhì)尼龍刷刷擦造模法具有操作方便、重復(fù)性好、成功率高、易推廣等優(yōu)點,能為肉芽組織增生性氣管狹窄形成機制的探究及治療方法的探索提供一種成熟、穩(wěn)定的實驗動物模型。目的：采用冷凍消融對氣管內(nèi)肉芽組織進行治療,觀察不同冷凍消融時間對氣管肉芽組織的影響,進而探究最佳冷凍消融時間,為肉芽組織增生性氣道狹窄患者制定規(guī)范化的冷凍消融治療提供實驗數(shù)據(jù)。方法：(1)選取造模10d后的肉芽組織增生性氣管狹窄兔實驗?zāi)Ｐ?將其隨機分為治療組、模型對照組(只進行氣管刷擦,未予冷凍消融治療),另設(shè)假手術(shù)組(只進行氣管橫切,未予刷擦及冷凍消融治療),其中治療組依不同冷凍消融時間可分為：30sec組、1min組、2min組。每組均8只。根據(jù)治療組不同的分組分別進行相應(yīng)時間的冷凍消融治療,同期時間點對模型對照組、假手術(shù)組再次予以氣管橫切；(3)所有治療組于冷凍消融干預(yù)后第7d取材,同期時間點對模型對照組和假手術(shù)組取材,行HE染色,并置入光學(xué)顯微鏡下測量出氣管黏膜下層厚度；(4)分別采用免疫組化、實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(Real Time-qPCR)的方法檢測各組氣管組織中CD34蛋白和mRNA的表達量,并進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：(1)肉眼觀察：1)假手術(shù)組氣管橫截面處光滑,呈蒼白色。無肉芽組織生長,管腔通暢；2)模型對照組、冷凍治療組氣管橫截面處可見不同程度的肉芽組織增生及管腔狹窄。(2)組織病理學(xué)觀察：1)氣管前正中處(冷凍消融治療區(qū)域)的黏膜下層明顯較其兩側(cè)(只刷擦,未予冷凍消融治療區(qū)域)��；2)假手術(shù)組氣管黏膜上皮完整；模型對照組、冷凍治療組均可見氣管黏膜上皮脫落、缺失及局部鱗狀上皮化生；3)模型組、1min組中黏膜下層厚度較假手術(shù)組、30sec組、2min組厚；(3)光鏡下氣管黏膜下層厚度的測量結(jié)果：1)假手術(shù)組中氣管黏膜下層較其他各組薄,差異具有顯著性差異(P0.05)；2)30sec組中氣管黏膜下層較其他治療組(1min組、2min組)及模型對照組薄,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；3)1min組中氣管黏膜下層厚度較模型對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；4)2min組中氣管黏膜下層較模型對照組薄,兩者相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(4)CD34的平均光密度表達測定結(jié)果：1)假手術(shù)組中CD34的平均光密度值較其他各組低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；2)30sec組中CD34的平均光密度值低于其他治療組(1mmin組、2min組)及模型對照組,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；3)1min組中和2min組中CD34的平均光密度高于模型對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(5) CD34mRNA的相對表達量測定結(jié)果：1)假手術(shù)組中CD34mRNA的相對表達量較模型對照組低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；2)30sec組中CD34mRNA的相對表達量低于其他治療組(1min組、2min組)和模型對照組,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；3)lmin組中CD34mRNA的相對表達量高于模型對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；4)2min組中CD34mRNA的相對表達量明顯低于模型對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);結(jié)論：2min冷凍消融均對肉芽組織形成具有一定的抑制作用,lmin冷凍消融對肉芽組織形成無明顯抑制作用,具體作用機制仍需進一步研究；2)在所有治療組中,30sec冷凍消融對肉芽組織形成的抑制作用最為明顯,其可能為最佳冷凍消融時間；3)CD34的表達量水平可作為一種反映肉芽組織增生程度的指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：新西蘭兔 肉芽組織 氣管狹窄 造模 肉芽組織 冷凍治療 免疫組化 CD34
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R-332;R562.12
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 第一章 兔肉芽組織增生性氣管狹窄模型的建立14-23
• 1 材料和方法14-17
• 2 結(jié)果17-20
• 3 討論20-23
• 第二章 探究不同冷凍消融時間對氣管肉芽組織的影響23-40
• 1 材料和方法23-29
• 2 結(jié)果29-38
• 3 討論38-40
• 結(jié)論40
• 參考文獻40-42
• 附錄42-44
• 致謝44-45
• 文獻綜述45-50
• 參考文獻48-50
• 作者簡歷50

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