檢測小鼠肝炎病毒的SNaPshot分型技術(shù)及其應(yīng)用
發(fā)布時間:2017-06-06 08:06
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【摘要】:建立一種能對MHV_1、MHV_3、JHM、A_(59) 4種常見小鼠肝炎病毒(Murine Hepatitis Virus,MHV)進(jìn)行分型檢測的SNaPshot新方法。根據(jù)MHV 4種常見毒株基因序列比對結(jié)果,設(shè)計內(nèi)外兩對PCR通用引物和4個單堿基延伸引物,提取MHV 4種常見毒株RNA,逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,純化擴(kuò)增產(chǎn)物,用SNaPshot方法進(jìn)行單堿基延伸,將產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管凝膠電泳,根據(jù)電泳結(jié)果分析毒株基因型。優(yōu)化SNaPshot分析條件,進(jìn)行靈敏度、特異性分析。用ELISA法和SNaPshot方法檢測41例小鼠(Mus musculus)血清樣本,將陽性樣本進(jìn)行克隆測序檢測。當(dāng)T1~T4引物修飾的poly T的數(shù)量分別為0、3、10和15,其濃度比為4
本文編號:425773
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