本文關(guān)鍵詞：卡波氏肉瘤病毒K9基因重組慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及其編碼蛋白功能初探，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:構(gòu)建卡波氏肉瘤病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)K9基因的重組慢病毒載體,并探究K9基因編碼的病毒干擾素調(diào)節(jié)因子1(viral IFN regulatory factor 1,v IRF1)對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)增殖的影響。方法:根據(jù)K9基因的核酸序列設(shè)計(jì)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的上下游引物。以實(shí)驗(yàn)室已有的真核表達(dá)載體p CI-K9-Flag為模板,PCR擴(kuò)增K9基因序列。PCR產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切后插入慢病毒載體p HAGE-CMVMCS-Izs-Green(簡稱p HAGE)中,構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒p HAGE-K9。將p HAGE-K9質(zhì)粒與包膜質(zhì)粒p MD2.G、包裝質(zhì)粒ps PAX2共同轉(zhuǎn)染人胚腎上皮細(xì)胞(293 T細(xì)胞),包裝K9基因的重組慢病毒。采用病毒梯度稀釋法測定病毒滴度。慢病毒感染HUVECs后,觀察綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá),蛋白質(zhì)印跡法檢測HUVECs中K9編碼的v IRF1蛋白的表達(dá)。采用流式分選技術(shù)獲得穩(wěn)定表達(dá)v IRF1蛋白的HUVECs。運(yùn)用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測v IRF1對(duì)HUVECs增殖的影響。結(jié)果:核酸序列測定結(jié)果表明,重組慢病毒質(zhì)粒p HAGE-K9構(gòu)建成功。蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示,K9基因重組慢病毒感染HUVECs后其編碼蛋白成功表達(dá)。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,穩(wěn)定表達(dá)v IRF1的HUVECs增殖能力顯著強(qiáng)于對(duì)照組。結(jié)論:KSHV K9基因編碼的v IRF1能夠促進(jìn)HUVECs的增殖。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 卡波氏肉瘤病毒 K基因 病毒干擾素調(diào)節(jié)因子 慢病毒 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 細(xì)胞增殖
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81571984)
【分類號(hào)】：R373.11
【正文快照】： 卡波氏肉瘤病毒(Kaposi's sarcoma-associatedherpesvirus,KSHV)又稱人皰疹病毒8型(humanherpesvirus 8,HHV-8),是一種γ-2型皰疹病毒,已被證實(shí)是卡波氏肉瘤的病原體[1]�？úㄊ先饬鼋M織中分布有大量的梭形細(xì)胞(其前體為內(nèi)皮細(xì)胞)和異常增生的新生血管,并存在炎性細(xì)胞浸潤[2]

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  本文關(guān)鍵詞：卡波氏肉瘤病毒K9基因重組慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及其編碼蛋白功能初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：425007