本文關(guān)鍵詞：EGCG-p抗EV71病毒的分子作用機(jī)理，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：EV71腸道病毒是導(dǎo)致手足口病的最主要病毒。每年有數(shù)百萬兒童遭受手足口病困擾,可是現(xiàn)今并沒有有效的治療藥物。EGCG是一種天然的抗病毒藥物,已經(jīng)被證明有多種病毒的抗病毒效果。EGCG具有抗多種病毒的功效,而且其成分來源于茶葉,毒副作用小對發(fā)展新藥擁有巨大的潛力。EGCG在水中不穩(wěn)定,而且容易氧化導(dǎo)致?lián)p失。為此,我們用的是已經(jīng)被證明具有抗病毒活性的經(jīng)過修飾的脂溶性的EGCG-p(結(jié)合了脂肪酸棕櫚酸酯Palmitate), EGCG-p提高了化合物的穩(wěn)定性。到目前為止,鮮有人對EGCG-p抗EV71病毒進(jìn)行研究,EGCG-p抗EV71病毒仍然是一個未知領(lǐng)域,為了驗(yàn)證EGCG-p具有抗EV71病毒的有效性,本文對EGCG-p體外抗EV71病毒進(jìn)行初步研究,旨在為進(jìn)一步的開發(fā)臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。EV71在人橫紋肌瘤細(xì)胞(RD細(xì)胞)中的增殖活動比其他細(xì)胞活躍,增殖效率比其他細(xì)胞高,因此選取RD細(xì)胞作為細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。我們用三種不同方法(先加藥物后加病毒；先加病毒后加藥物；病毒與藥物同時添加)研究EGCG-p抗EV71病毒效果,我們先對EV71病毒進(jìn)行毒力測試,測得病毒毒力后再運(yùn)用不同添加病毒與藥物的次序方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),當(dāng)細(xì)胞發(fā)生明顯病變后運(yùn)用氯仿抽提RNA法進(jìn)行RNA抽提,然后逆轉(zhuǎn)錄以獲得EV71病毒cDNA,最后對其進(jìn)行熒光定量PCR檢測,結(jié)果顯示先加藥物后加病毒具有顯著效果。據(jù)此,我們認(rèn)為EGCG-p具有預(yù)防EV71病毒的效果。為了進(jìn)一步研究EGCG-p抗EV71病毒的分子作用機(jī)理,本研究克隆表達(dá)了SCARB2受體蛋白與EV71病毒蛋白VP1,通過分子相互作用儀對SCARB2、EGCG-p與VP1進(jìn)行相互作用。SCARB2受體與VP1進(jìn)行測試,結(jié)果顯示SCARB2受體與VP1相互作用的親和力平均值是0.045μM,Full R2是0.96,說明軟件擬合計(jì)算可信度比較高。然后我們再對SCARB2受體與EGCG-p進(jìn)行相互作用,計(jì)算出SCARB2受體與EGCG-p相互作用的親和力平均值是0.0176μM,Full R2是0.95,說明軟件擬合計(jì)算可信度比較高。最后對SCARB2+EGCG-p與VP1的進(jìn)行相互作用。比較SCARB2受體與VP1相互作用的親和力平均值是0.045μM。SCARB2+EGCG-p與VP1相互作用的親和力平均值是0.549μM,FullR2是0.925。得出在EGCG-p存在下,SCARB2與VP1的親和力降低了,從分子水平上說明EGCG-p具有抗病毒作用。從這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得出EGCG-p能與受體蛋白SCARB2結(jié)合,阻止了EV71病毒的入侵,從分子水平上證明了EGCG-p能起到抗病毒作用,起到預(yù)防效果。
【關(guān)鍵詞】：EGCG-p EV71 SCARB2 VP1 抗病毒 分子作用機(jī)理
【學(xué)位授予單位】：廣西師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 研究背景8-15
• 1.1 手足口病8
• 1.2 病毒8-9
• 1.3 病毒侵入細(xì)胞的機(jī)理9-10
• 1.4 EV71腸道病毒10
• 1.5 人腸道病毒EV71受體10-12
• 1.6 EGCG12
• 1.7 EV71藥物的研究進(jìn)展及其意義12-13
• 1.8 本研究目的、意義及其技術(shù)路線13-15
• 第二章 EGCG-p的抗病毒效果15-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15
• 2.1.1 主要儀器及試劑15
• 2.1.2 溶液配置15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 2.2.1 細(xì)胞毒性試驗(yàn)15-16
• 2.2.2 EV71病毒對細(xì)胞半數(shù)感染量(TCID50)測定16
• 2.2.3 細(xì)胞和病毒的培養(yǎng)16
• 2.2.4 RNA的提取16
• 2.2.5 逆轉(zhuǎn)錄以獲得EV71病毒cDNA16-17
• 2.2.6 熒光定量PCR檢測EV71 mRNA17-18
• 2.3 結(jié)果18-22
• 2.3.1 細(xì)胞毒性試驗(yàn)分析18-19
• 2.3.2 EV71病毒滴度19
• 2.3.3 EGCG-p的抗病毒效果19-22
• 2.4 討論22-23
• 第三章 目的蛋白的表達(dá)與純化23-31
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 3.1.1 主要儀器及試劑23
• 3.1.2 溶液配置23-24
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法24-31
• 3.2.1 目的基因SCARB2的擴(kuò)增24-25
• 3.2.1.1 人RD細(xì)胞總RNA的提取24
• 3.2.1.2 逆轉(zhuǎn)錄以獲得cDNA24-25
• 3.2.1.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)反應(yīng)體系,SCARB2的PCR擴(kuò)增25
• 3.2.1.4 DNA的片段電泳回收25
• 3.2.2 pET28a-SCARB2質(zhì)粒的構(gòu)建25-27
• 3.2.3 SCARB2的過表達(dá)27
• 3.2.4 SCARB2蛋白純化27-28
• 3.2.5 SCARB2蛋白表達(dá)純化實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-29
• 3.2.6 蛋白濃度的測定29-31
• 第四章 SCARB2與EGCG-p、VP1的分子相互作用研究31-38
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料31-32
• 4.1.1 試劑溶液31
• 4.1.2 溶液31-32
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法32-35
• 4.2.1 SCARB2受體與VP1親和力測定32-33
• 4.2.2 SCARB2受體與EGCG-p親和力測定33
• 4.2.3 SCARB2+EGCG-p與VP1親和力測定33-35
• 4.3 結(jié)果與討論35-38
• 4.3.1 SCARB2受體與VP1的相互作用35-36
• 4.3.2 SCARB2受體與EGCG-p相互作用36-37
• 4.3.3 SCARB2+EGCG-p與VP1的相互作用37-38
• 第五章 討論與總結(jié)38-40
• 5.1 討論38
• 5.2 主要結(jié)論38-39
• 5.3 創(chuàng)新點(diǎn)39
• 5.4 不足與展望39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 附圖44-45
• 致謝45-46

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 秦遠(yuǎn)超;茶多酚及其氧化產(chǎn)物與蛋白質(zhì)絡(luò)合特性的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2003年06期

2 朱小茜,徐曉燕,黃義德,武德傳;多酚類物質(zhì)對煙草品質(zhì)的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年10期

3 嚴(yán)贊開;;仙人掌中多酚的分光光度法測定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年13期

4 李莉;田士林;;蘋果中多酚含量測定與比較[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年20期

5 趙洪顏;林昊;金玉姬;樸仁哲;;地黃葉片提取物抗氧化活性及其薄層色譜的初步研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年04期

6 呂群金;衣杰榮;丁勇;;微波法提取楊桃渣中多酚的工藝研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年15期

7 周貞兵;戴騰飛;王士長;梁珠民;;馬尾藻多酚的提取·分離提純及抗菌活性檢驗(yàn)[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年17期

8 滕道祥;馬利華;秦衛(wèi)東;;牛蒡多酚的提取及清除DPPH自由基的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年25期

9 杜運(yùn)平;徐浩;張宗和;黃嘉玲;;板栗苞多酚提取條件的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年02期

10 張佳琪;黃灝;呂遠(yuǎn)平;姚開;;改性魔芋葡甘露聚糖涂膜在果蔬保鮮上的應(yīng)用研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年23期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 宋宇琴;崔芳;劉艷紅;吳國良;王勇;;核桃枝條總酚和黃酮類物質(zhì)含量的測定[A];第四屆全國干果生產(chǎn)、科研進(jìn)展研討會論文集[C];2005年

2 郝艷賓;齊建勛;王克建;張建甫;吳春林;王維霞;;核桃仁中的多酚及其抗氧化活性的初步研究[A];第四屆全國干果生產(chǎn)、科研進(jìn)展研討會論文集[C];2005年

3 彭鑫林;王輝憲;謝聃;馬玉美;歐陽建文;王仁才;熊興耀;;葡萄籽中多酚的超聲波提取及提取物中齊墩果酸的含量分析[A];中國園藝學(xué)會第十屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2005年

4 王克建;范志遠(yuǎn);齊建勛;郝艷賓;;鐵核桃品種“漾泡”、“三臺”種仁主要營養(yǎng)成分分析[A];第五屆全國干果生產(chǎn)、科研進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

5 王亞娟;單志華;楊利華;邵雙喜;;結(jié)合鞣中氧化淀粉對鞣劑的吸收阻尼[A];2010年全國皮革化學(xué)品會議論文集[C];2010年

6 王全杰;李超;王延青;;核桃青皮中單寧的類型及含量測定[A];2010年全國皮革化學(xué)品會議論文集[C];2010年

7 張桂潔;;菜粕中所含抗?fàn)I養(yǎng)因子作用機(jī)理的研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)豬學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會“回盛生物”杯全國養(yǎng)豬技術(shù)論文大賽論文集[C];2009年

8 呂鵬;張振凌;;山藥加工炮制及非藥用部位的研究進(jìn)展[A];2010中藥炮制技術(shù)、學(xué)術(shù)交流暨產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇論文集[C];2010年

9 韓玲玲;苑兆和;馮立娟;;石榴多酚的研究進(jìn)展[A];中國觀賞園藝研究進(jìn)展2012[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱立才;植物多酚的高速逆流色譜分離及特性研究[D];華南理工大學(xué);2010年

2 王延書;葡萄果實(shí)著色前后ABA代謝合成關(guān)鍵酶的基因表達(dá)分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 李春明;楊樹品系低溫生理響應(yīng)及相關(guān)差異蛋白分析[D];北京林業(yè)大學(xué);2011年

4 谷加存;中國東北主要造林樹種細(xì)根壽命及影響因子研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2011年

5 李彥杰;黃原膠分子的輻射修飾、產(chǎn)物特征及功能特性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

6 李倩;馬鈴薯對水分脅迫的生理響應(yīng)及抗旱調(diào)控措施研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 李國龍;甜菜苗期對干旱適應(yīng)的生理生化及分子機(jī)制研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 王瑞;植物多酚對皮革中Cr（Ⅵ）的防治機(jī)理及防治作用研究[D];陜西科技大學(xué);2011年

9 李芒;肚倍蚜適應(yīng)單寧環(huán)境機(jī)理的初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 羅海波;鮮切茭白品質(zhì)劣變機(jī)理及控制技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鐘慧臻;荔枝果肉多酚及脂肪酸指紋圖譜初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 萬鵬;荔枝果汁非酶褐變機(jī)理研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 余軒;‘磨盤柿’果實(shí)乙醇和凍融脫澀技術(shù)的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 王秀菊;藍(lán)莓干酒及藍(lán)莓酒渣花色苷提取工藝的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 徐睿;海帶和菲律賓蛤仔提取物對酪氨酸酶活性和黑素生成影響的研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

6 黃北川;橄欖多酚中酪醇等成分的分離純化研究[D];西北大學(xué);2010年

7 黃珊;大球蓋菇酚類物質(zhì)的提取及其抗氧化性研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2010年

8 肖青青;個舊雞街農(nóng)作物食品安全現(xiàn)狀及整治技術(shù)[D];昆明理工大學(xué);2010年

9 王莉莉;PP無紡布上功能分子的固定及其吸附性能研究[D];昆明理工大學(xué);2010年

10 衣申艷;甘薯莖葉多酚類物質(zhì)的提取及其基因型差異與環(huán)境效應(yīng)的研究[D];浙江大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：EGCG-p抗EV71病毒的分子作用機(jī)理，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：422401