本文關鍵詞：攜帶EGFP基因的戊型肝炎病毒重組質(zhì)粒的構建及其感染性的驗證，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了構建攜帶增強型綠色熒光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)重組質(zhì)粒,轉染人肺癌細胞A549細胞驗證其感染性,PCR法分兩段擴增HEV全基因組序列和EGFP基因序列,將EGFP報告基因插入到HEV ORF2基因下游,并克隆到體外轉錄表達載體pGEM屮-7Zf(+)上。然后利用脂質(zhì)體轉染法將重組質(zhì)粒轉入A549細胞,24h后在熒光顯微鏡下觀察EGFP的表達;轉染72h后,利用免疫熒光法檢測HEV ORF2蛋白的表達。轉染7d后將發(fā)生病變的A549細胞收集作為接種物,接種A549細胞驗證攜帶EGFP的HEV-EGFP重組病毒的感染性。結果顯示經(jīng)酶切和測序鑒定攜帶EGFP的HEV重組表達質(zhì)粒pGEM-HEV-EGFP構建成功;EGFP基因與HEV在A549細胞中可融合表達;攜帶EGFP的HEV重組表達質(zhì)粒轉染A549細胞7d后出現(xiàn)病變,并且連續(xù)傳代3代仍具有感染性。本研究成功構建了攜帶EGFP的HEV全基因組重組質(zhì)粒pGEM-HEV-EGFP,并成功感染A549細胞,為進一步研究HEV的復制機制及致病機理奠定基礎。
【作者單位】： 昆明理工大學醫(yī)學院;中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所;大連雅立峰生物制藥有限公司;云南省洱源縣右所鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站;
【關鍵詞】： 戊型肝炎病毒(HEV) 增強型綠色熒光蛋白(EGFP) 感染性
【基金】：國家自然科學基金(項目號:31360619;81660338) 云南省自然科學基金(項目號:2013FB032) 中國博士后科學基金(項目號:2014M562672;2015T81138)
【分類號】：R373.21
【正文快照】： 3.大連雅立峰生物制藥有限公司,大連116000;4.云南省洱源縣右所鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,大理671200)戊型肝炎(Hepatitis E,HE)已成為一種全球性的疾病,戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是引發(fā)戊型肝炎的病原體,由HEV引起的病毒性肝炎每年大約2千萬例。戊型肝炎在許多發(fā)展中國家已成

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