中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system, CNS)疾病與損傷,如帕金森病(Parkinson's disease, PD)、脊髓損傷等比較難以自我修復(fù),神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells, NSCs)移植被認(rèn)為是具有潛在應(yīng)用價值的治療手段,但NSCs來源困難。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)以其多分化潛能、可源于自體、免疫源性低、易擴增、能分泌多種細(xì)胞因子并參與細(xì)胞微環(huán)境的構(gòu)建等優(yōu)勢,為CNS疾病與損傷的治療提供了一個新的思路。本文旨在研究BMSCs擴增后通過與NSCs之間的相互作用促進PD體外實驗細(xì)胞模型的修復(fù),進一步為BMSCs移植治療與修復(fù)CNS疾病與損傷提供相應(yīng)的實驗依據(jù)。 本文首先采用膠原凝膠、中空纖維膜(hollow fiber membranes, HFMs)和自行研發(fā)設(shè)計的氣升式環(huán)流生物反應(yīng)器(air-lift loop bioreactor, ALB),建立一種可使細(xì)胞免受剪切力損傷的三維動態(tài)擴增體系,將BMSCs在體外先行擴增。在擴增的過程中,通過取樣檢測吸光度...

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及其促進神經(jīng)修復(fù)的研究簡介
    1.1 概述
    1.2 BMSCs生物學(xué)性能簡介
        1.2.1 BMSCs的發(fā)現(xiàn)、定義
        1.2.2 BMSCs的生物學(xué)特性
        1.2.3 BMSCs的主要表面標(biāo)志
        1.2.4 BMSCs的多向分化潛能
        1.2.5 BMSCs的旁分泌功能
        1.2.6 BMSCs體外擴增研究進展
    1.3 BMSCs促進神經(jīng)修復(fù)的相關(guān)研究
        1.3.1 BMSCs移植治療CNS疾病及存在的問題
        1.3.2 BMSCs促進神經(jīng)修復(fù)的作用機理
        1.3.3 BMSCs與NSCs相互作用的研究
    1.4 帕金森病細(xì)胞模型
        1.4.1 細(xì)胞凋亡與帕金森病
        1.4.2 細(xì)胞凋亡模型建立方法
    1.5 本文的選題依據(jù)和研究內(nèi)容
2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取及體外三維動態(tài)培養(yǎng)與擴增
    2.1 引言
    2.2 實驗儀器與材料
        2.2.1 實驗儀器與設(shè)備
        2.2.2 藥品與試劑
        2.2.3 溶液與試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 BMSCs的分離與培養(yǎng)
        2.3.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.3.3 膠原凝膠的微觀結(jié)構(gòu)
        2.3.4 BMSCs的準(zhǔn)備
        2.3.5 BMSCs在ALHFMB內(nèi)三維動態(tài)擴增
        2.3.6 細(xì)胞增殖
        2.3.7 代謝分析
        2.3.8 ALHFMB內(nèi)氧、二氧化碳分壓及pH值測定
        2.3.9 支架內(nèi)細(xì)胞活性檢測
        2.3.10 支架內(nèi)細(xì)胞形態(tài)觀察
        2.3.11 干細(xì)胞表面特異性標(biāo)記檢測
        2.3.12 多向分化潛能的檢測
        2.3.13 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 原代及傳代培養(yǎng)的BMSCs生長形態(tài)
        2.4.2 膠原凝膠的微觀結(jié)構(gòu)
        2.4.3 細(xì)胞增殖
        2.4.4 支架內(nèi)細(xì)胞的代謝
        2.4.5 ALHFMB內(nèi)氧、二氧化碳分壓及pH值
        2.4.6 支架內(nèi)細(xì)胞活性
        2.4.7 支架內(nèi)細(xì)胞的形態(tài)
        2.4.8 細(xì)胞表面特異性蛋白的表達
        2.4.9 擴增細(xì)胞的多向分化潛能
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
3 BMSCs與三維條件下NSCs相互作用的研究
    3.1 引言
    3.2 實驗儀器與材料
        3.2.1 實驗儀器與設(shè)備
        3.2.2 藥品與試劑
        3.2.3 溶液與試劑的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 BMSCs的分離、培養(yǎng)、擴增及鑒定
        3.3.2 NSCs的分離與培養(yǎng)
        3.3.3 NSCs誘導(dǎo)分化及免疫組織化學(xué)鑒定
        3.3.4 海藻酸鈣膠珠的制備
        3.3.5 NSCs微囊化培養(yǎng)
        3.3.6 BMSCs與NSCs共培養(yǎng)
        3.3.7 增殖共培養(yǎng)后BMSCs對NSCs的影響
        3.3.8 分化共培養(yǎng)后NSCs的流式細(xì)胞儀檢測
        3.3.9 增殖共培養(yǎng)后NSCs對BMSCs的影響
        3.3.10 分化共培養(yǎng)后NSCs對BMSCs的影響
        3.3.11 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 NSCs的原代及傳代培養(yǎng)
        3.4.2 NSCs免疫組織化學(xué)及誘導(dǎo)分化鑒定
        3.4.3 適宜NSCs生長的海藻酸鈣膠珠
        3.4.4 NSCs微囊化培養(yǎng)
        3.4.5 增殖共培養(yǎng)后BMSCs對NSCs的影響
        3.4.6 分化共培養(yǎng)后BMSCs對NSCs的影響
        3.4.7 增殖共培養(yǎng)后NSCs對BMSCs的影響
        3.4.8 分化共培養(yǎng)后NSCs對BMSCs的影響
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
4 BMSCs在NSCs保護去血清誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡中的作用
    4.1 引言
    4.2 實驗儀器與材料
        4.2.1 實驗儀器與設(shè)備
        4.2.2 藥品與試劑
        4.2.3 藥品與試劑的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 BMSCs的分離、培養(yǎng)、擴增及鑒定
        4.3.2 NSCs的分離、培養(yǎng)與鑒定
        4.3.3 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)及去血清誘導(dǎo)凋亡模型的建立
        4.3.4 海藻酸鈣膠珠與PC12細(xì)胞的生物相容性
        4.3.5 NSCs對去血清誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的保護作用
        4.3.6 BMSCs在NSCs保護去血清誘導(dǎo)PC 12細(xì)胞凋亡中的作用
        4.3.7 Hoechst 33342染色分析
        4.3.8 流式細(xì)胞儀分析PC12細(xì)胞凋亡率
        4.3.9 流式細(xì)胞儀分析PC12細(xì)胞周期
        4.3.10 培養(yǎng)基中GDNF濃度的測定
        4.3.11 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)及去血清誘導(dǎo)凋亡模型
        4.4.2 海藻酸鈣膠珠與PC12細(xì)胞的生物相容性
        4.4.3 單獨NSCs對去血清誘導(dǎo)凋亡的PC12細(xì)胞存活率的作用
        4.4.4 BMSCs與NSCs對誘導(dǎo)凋亡的PC12細(xì)胞存活率的共同作用
        4.4.5 Hoechst 33342染色分析
        4.4.6 流式細(xì)胞儀分析PC12細(xì)胞凋亡率
        4.4.7 流式細(xì)胞儀分析PC12細(xì)胞周期
        4.4.8 不同培養(yǎng)條件下培養(yǎng)基中GDNF濃度的比較
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
結(jié)論
工作展望
創(chuàng)新點摘要
參考文獻
附錄A 英文縮略詞
作者簡介
致謝



本文編號：4045044