本文關(guān)鍵詞：缺氧調(diào)控表達(dá)的NT-3逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建與鑒定含有5個(gè)拷貝缺氧反應(yīng)元件(five copies of hypoxia responsive elements,5HRE)的缺氧調(diào)控表達(dá)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。方法用PCR、酶切和連接等分子克隆技術(shù)將5HRE和人來源NT-3片段克隆入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLNCX中,構(gòu)建重組逆轉(zhuǎn)錄病毒穿梭質(zhì)粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP。經(jīng)PT67包裝細(xì)胞包裝、高速離心純化和濃縮等方法,獲得逆轉(zhuǎn)錄病毒RV-5HRE-NT3;用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染NIH 3T3細(xì)胞48h后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)并計(jì)算出病毒滴度。結(jié)果成功構(gòu)建了重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體質(zhì)粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP,并獲得相應(yīng)的逆轉(zhuǎn)錄病毒RV-5HRE-NT3,經(jīng)過高速離心純化和濃縮后,其滴度可達(dá)9.1×10~6 cfu/mL。結(jié)論成功構(gòu)建了缺氧調(diào)控表達(dá)的NT-3逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,為研究外源基因的缺氧調(diào)控特異性表達(dá)奠定了工作基礎(chǔ)。
【作者單位】： 西安醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部神經(jīng)生物學(xué)研究所;青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部解剖學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 缺氧調(diào)控表達(dá) 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81301041) 陜西省青年科技新星項(xiàng)目(No.2015KJXX-43) 陜西省優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)經(jīng)費(fèi)資助[No.陜教辦(2014)3-1001] 陜西省教育廳專項(xiàng)科研計(jì)劃項(xiàng)目(No.2013JK0756,14JK1614) 青海省應(yīng)用基礎(chǔ)研究資助項(xiàng)目(No.2013-Z-727)~~
【分類號(hào)】：R364.4
【正文快照】： 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(neurotrophin-3,NT-3)是一種具有多功能的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,除了具有維持神經(jīng)元存活、誘導(dǎo)神經(jīng)元分化和促進(jìn)神經(jīng)損傷修復(fù)的傳統(tǒng)神經(jīng)保護(hù)作用外,其還與血管發(fā)生密切相關(guān),是治療缺血性卒中的理想選擇之一[1]。采用基因表達(dá)載體將NT-3導(dǎo)入腦組織或腦血管中,通過其在局

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張軍峰;徐曦;;缺氧特異性調(diào)控基因表達(dá)在缺血性卒中治療中的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2015年05期

2 張軍峰;史利利;張力;趙朝華;楊蓬勃;張建水;劉勇;徐曦;;低氧反應(yīng)元件介導(dǎo)的低氧調(diào)控的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3表達(dá)上調(diào)減少低氧誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡[J];解剖學(xué)報(bào);2015年05期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉健;正、反義VEGF基因轉(zhuǎn)染對(duì)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖行為的影響[D];山東大學(xué);2011年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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2 張瑞萍;云琳;彭玲;陸斌;周倩;王皓;郭亞軍;;高效轉(zhuǎn)染人T細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建及應(yīng)用[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2006年04期

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2 陳香梅;徐開林;潘秀英;李振宇;鹿群先;李德鵬;;攜帶綠色熒光蛋白基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及其介導(dǎo)的T細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 陳香梅;徐開林;潘秀英;李振宇;鹿群先;李德鵬;;攜帶綠色熒光蛋白基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及其介導(dǎo)的T細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移研究[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

4 陳香梅;徐開林;潘秀英;李振宇;鹿群先;李德鵬;;攜帶綠色熒光蛋白基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及其介導(dǎo)的T細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

5 邱婷婷;徐開林;潘秀英;李振宇;;PIG-A基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及表達(dá)[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

6 張秀亞;王珊;孔祥如;;攜帶MDR1基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的安全性研究[A];第八屆全國(guó)兒童腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

7 高美華;石學(xué)香;李先平;張蓓;王秋波;王冰;;人CD59 RNAi逆轉(zhuǎn)錄病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建與鑒定[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

8 張志人;王春生;王子竹;樸善花;安鐵洙;;小鼠microRNA367逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建與檢測(cè)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十七次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2012年

9 李江琪;郭坤元;杜江;李玉華;宋朝陽;;特異性造血細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLNCD34X的構(gòu)建及表達(dá)[A];第七屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

10 李俊剛;陳耀凱;王宇明;;可回復(fù)性永生化逆轉(zhuǎn)錄病毒載體phTERTGPlox的構(gòu)建與表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陸志城;基因療法解禁有望[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 惠宏襄;逆轉(zhuǎn)錄病毒載體表達(dá)的TGFα反義RNA對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞BT325的生長(zhǎng)抑制和誘導(dǎo)分化作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1993年

2 王博蔚;多藥耐藥基因MDR1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)染人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞的研究[D];吉林大學(xué);2006年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 李俊剛;人肝細(xì)胞可回復(fù)永生化逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 曹靖;人前腦啡肽原基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及其表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2006年

3 梁浩;融合表達(dá)人白細(xì)胞介素-2（hIL-2）和增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2006年

4 許建;基于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的高效表達(dá)系統(tǒng)的建立和應(yīng)用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

5 鄧俊暉;人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因啟動(dòng)子調(diào)控綠色熒光蛋白基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建[D];江西醫(yī)學(xué)院;2005年

6 馬驍;雞RNAi逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及在BAF57基因功能研究中的初步應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 孫淑紅;應(yīng)用siRNA特異沉默EBV潛伏期基因EBNA2表達(dá)的初步研究[D];青島大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：缺氧調(diào)控表達(dá)的NT-3逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：402896