焦磷酸測序法檢測OCT4啟動子在大鼠骨髓源性肝干細胞分化中的甲基化變化
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【摘要】:骨髓間充質干細胞具有分化成為肝細胞的潛能已得到證實,但其分化的調控機理還不完全清楚。通過檢測大鼠骨髓源性肝干細胞(rat bone marrow-derived liver stem cells,RBMLSCs)誘導分化為肝細胞過程中OCT4啟動子甲基化的變化,來探討啟動子甲基化調控細胞分化的機制。RBMLSCs用25μg/L重組人肝細胞生長因子和0.1 nmol/L地塞米松進行誘導,在誘導之后不同時間點(0 d,7 d,14 d)提取細胞的DNA及RNA。用熒光定量PCR法檢測白蛋白(albumin,Alb)和OCT4的m RNA表達水平,應用焦磷酸測序法定量檢測OCT4基因的啟動子中4個Cp G位點的甲基化變化。結果表明:在RBMLSCs分化過程中,Alb m RNA持續(xù)增高(P0.05),但OCT4 m RNA表達在7 d及14 d明顯減少(P0.005);同時OCT4啟動子上游的Cp G 1-2-3甲基化頻率顯著上升(P0.001),但Cp G 4甲基化無明顯變化。這些結果說明OCT4啟動子高甲基化可能導致其m RNA表達減少,RBMLSCs多能性消失,但Cp G 4并不參與這一分化調控過程。
【作者單位】: 南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院肝膽外科;
【關鍵詞】: 大鼠骨髓源性肝干細胞 OCT 啟動子甲基化 焦磷酸測序
【基金】:廣東省科技計劃項目(2010B080710169) 國家衛(wèi)計委重點臨床?瀑Y助項目(W0211WAI44)
【分類號】:R329.2
【正文快照】: 干細胞在一定誘導條件下可分化為肝細胞、神經細胞、軟骨細胞等多種成體細胞,具有多向分化潛能[1]。骨髓間充質干細胞是一類來源廣泛的成體干細胞,分化為肝細胞的比例較高[2],有望成為終末期肝病的一種治療手段。然而隨著對骨髓間充質干細胞的深入研究,一些負面作用被發(fā)現(xiàn),特
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,本文編號:402797
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