發(fā)布時(shí)間：2025-01-14 18:36

　　 目的為解決熒光定量PCR(qPCR)方法不能區(qū)分死菌和活菌的問(wèn)題,探索一種快速定量檢測(cè)"活的"沙門菌的技術(shù)路線。方法將不同濃度疊氮溴化乙錠(EMA)作用于不同濃度的死/活沙門菌后,用qPCR檢測(cè)沙門菌Ct值,確定EMA的最優(yōu)使用濃度。在混合菌量為10～6、10～5、10～4、10～3CFU/mL,活菌比例為0%、10%、30%、50%、70%、100%條件下,確定EMA處理過(guò)的活菌+死菌,未加EMA的活菌+死菌,未加EMA的活菌+生理鹽水三組菌的Ct值,研究EMA-qPCR法對(duì)死/活沙門菌的區(qū)分能力。結(jié)果 EMA濃度低于50μg/mL,EMA處理活菌組與EMA未處理活菌組的Ct值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜合考慮,EMA最優(yōu)使用濃度為10μg/mL。采用10μg/mL EMA進(jìn)行預(yù)處理,混合菌量為10～6、10～5、10～4、10～3CFU/mL時(shí)得出的結(jié)果一致:活菌比例為0%,≤50%,>50%時(shí),EMA處理過(guò)的活菌+死菌與未加EMA的活菌+死菌兩組Ct值差異(ΔCt)分別為≥5,≥1,<1。同時(shí),除活菌比例0%外,其他活菌濃度下,EMA處理過(guò)的活菌+死菌與未加EMA的活菌+生理...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        1.1.2 試劑和儀器
        1.1.3 引物和探針
    1.2 方法
        1.2.1 優(yōu)化EMA使用濃度
            1.2.1. 1 沙門菌活菌、死菌的制備
            1.2.1.2 EMA處理與DNA提取
            1.2.1. 3 熒光定量PCR反應(yīng)條件
        1.2.2 EMA-qPCR檢測(cè)沙門菌的死/活混合物
2 結(jié)果
    2.1 EMA最優(yōu)濃度
    2.2 EMA-qPCR檢測(cè)純培養(yǎng)的沙門菌死/活混合物
3 討論



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