本文關鍵詞：金黃色葡萄球菌α-溶血素的克隆及可溶性融合表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:表達純化可溶性金黃色葡萄球菌α-溶血素(α-HL)作為抗原,用以后期制備全人源抗α-HL抗體,為金黃色葡萄球菌感染提供新的治療手段。方法:提取金黃色葡萄球菌總RNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術,擴增α-HL cDNA,將cDNA雙酶切后與載體pCold-TF連接,轉(zhuǎn)化E.coli TOPO 10,菌落PCR及測序驗證插入基因的正確性。將測序正確的α-HL/pCold-TF重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli BL21進行低溫誘導表達,SDS-PAGE和Western blot驗證表達產(chǎn)物的正確性。結(jié)果:PCR擴增得到的α-HL基因大小為900 bp左右;將重組質(zhì)粒α-HL/pCold-TF轉(zhuǎn)化E.coli BL21,經(jīng)15℃低溫誘導表達24 h,誘導得到可溶性的α-HL融合蛋白,融合蛋白大小為90 kD左右(載體上的TF分子伴侶大小為45 kD左右);經(jīng)Western blot驗證表達純化的蛋白為α-HL融合蛋白。將純化的α-HL蛋白注射BABL/c小鼠制備抗血清,結(jié)果顯示抗血清與金黃色葡萄球菌結(jié)合良好,效價大于10 000倍。結(jié)論:成功對α-HL進行了基因克隆,并成功表達純化到可溶性的α-HL融合蛋白。
【作者單位】： 四川醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院;
【關鍵詞】： 金黃色葡萄球菌 α-HL 可溶性表達
【基金】：四川省科技廳項目(LY-96,013SZZ005) 瀘州市科技局項目(2013LZLY-K77)
【分類號】：R392
【正文快照】： 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是人類感染性疾病的重要病原體,特別容易引發(fā)肺炎、皮膚膿腫和菌血癥,感染后具有很高的死亡率�？股厥侵委熃瘘S色葡萄球菌感染的主要手段,長期以來是有效的。隨著近年世界范圍內(nèi)的抗生素濫用越來越嚴重,金黃色葡萄球菌出現(xiàn)了對幾乎所

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  本文關鍵詞：金黃色葡萄球菌α-溶血素的克隆及可溶性融合表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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