【目的】糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用是引起非創(chuàng)傷性股骨頭缺血性壞死的重要危險(xiǎn)因素，而非C創(chuàng)傷性股骨頭缺血性壞死患者往往伴隨著內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能的改變，明確糖皮質(zhì)激素對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能的影響及其作用機(jī)制，對(duì)疾病的預(yù)防和早期治療具有重要的意義。 【方法】（1）密度梯度離心法分離新生兒臍帶血單個(gè)核細(xì)胞并培養(yǎng)于EGM-2培養(yǎng)基中，通過形態(tài)學(xué)觀察、結(jié)合FITC-標(biāo)記荊豆凝集素-1和吞噬DiL-標(biāo)記乙�；兔芏戎鞍纂p染實(shí)驗(yàn)、量子點(diǎn)免疫熒光技術(shù)檢測(cè)內(nèi)皮型一氧化氮合成酶的蛋白表達(dá)以及體外小管形成能力對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞進(jìn)行鑒定；（2）采用不同濃度地塞米松干預(yù)內(nèi)皮祖細(xì)胞，CCK-8和EdU試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖能力、Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力、小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞體外小管形成能力、一氧化氮檢測(cè)試劑盒檢測(cè)一氧化氮生成濃度；（3）分別使用MAPK/ERK細(xì)胞信號(hào)通路特異性抑制劑PD98059和PI3K特異性抑制劑LY294002和Wortmannin預(yù)先干預(yù)內(nèi)皮祖細(xì)胞，Western blotting和實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)糖皮質(zhì)激素對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞Akt和eNOS的表達(dá)的影響。 【結(jié)果】（1）臍帶血分離的單個(gè)核...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1密度梯度離心分離單個(gè)核細(xì)胞APBS稀釋后臍帶血鋪于人淋巴細(xì)胞分離液，界面完整；B離心后可見分為四層，從上至下依次為：血漿層、單個(gè)核細(xì)胞層、分離液

圖1密度梯度離心分離單個(gè)核細(xì)胞APBS稀釋后臍帶血鋪于人淋巴細(xì)胞分離液，界面完整；B離心后可見分為四層，從上至下依次為：血漿層、單個(gè)核細(xì)胞層、分離液層和紅細(xì)胞層。2內(nèi)皮祖細(xì)胞的鑒定2.1內(nèi)皮祖細(xì)胞形態(tài)學(xué)分離的單個(gè)核細(xì)胞形態(tài)較小，大小均一，細(xì)胞呈圓形；第4天可見....

圖2培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察A剛分離的單個(gè)核細(xì)胞形態(tài)較小,圓形,不均勻懸浮分布于培養(yǎng)板底部(×100);B

圖2培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察A剛分離的單個(gè)核細(xì)胞形態(tài)較小,圓形,不均勻懸浮分布于培養(yǎng)板底部(×100);B培養(yǎng)第4天可見貼壁細(xì)胞形成較多的細(xì)胞集落,大小不一,呈發(fā)芽式向外生長(zhǎng)(×100);C培養(yǎng)第7天可見細(xì)胞形成較大的集落,中心有部分細(xì)胞壞死,周圍細(xì)胞呈梭形,放射狀....

圖3激光共聚焦顯微鏡下細(xì)胞雙染陽性（×400）

20圖3激光共聚焦顯微鏡下細(xì)胞雙染陽性（×400）A細(xì)胞雙染色陽性；BDAPI標(biāo)記細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光；C細(xì)胞膜結(jié)合FITC標(biāo)記荊凝集素-1呈綠色熒光；D細(xì)胞攝取DIL標(biāo)記乙酰化低密度脂蛋白呈紅色熒光。2.3小管形成實(shí)驗(yàn)內(nèi)皮祖細(xì)胞在Matrigel基....

圖4小管形成實(shí)驗(yàn)內(nèi)皮祖細(xì)胞在Matrigel基質(zhì)膠上生長(zhǎng)，48h可見細(xì)胞互相連接，形成典型的小管狀結(jié)構(gòu)（×100倍）

小管形成實(shí)驗(yàn)內(nèi)皮祖細(xì)胞在Matrigel基質(zhì)膠上生長(zhǎng)，48h可見細(xì)胞型的小管狀結(jié)構(gòu)（×100倍）。量子點(diǎn)免疫熒光檢測(cè)內(nèi)皮祖細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮型一氧化氮合成酶。皮型一氧化氮合成酶位于細(xì)胞漿,量子點(diǎn)在545nm激發(fā)波長(zhǎng)下顯示紅

本文編號(hào)：3974043