【目的】糖皮質(zhì)激素的應用是引起非創(chuàng)傷性股骨頭缺血性壞死的重要危險因素，而非C創(chuàng)傷性股骨頭缺血性壞死患者往往伴隨著內(nèi)皮祖細胞數(shù)量和功能的改變，明確糖皮質(zhì)激素對內(nèi)皮祖細胞數(shù)量和功能的影響及其作用機制，對疾病的預防和早期治療具有重要的意義。 【方法】（1）密度梯度離心法分離新生兒臍帶血單個核細胞并培養(yǎng)于EGM-2培養(yǎng)基中，通過形態(tài)學觀察、結(jié)合FITC-標記荊豆凝集素-1和吞噬DiL-標記乙�；兔芏戎鞍纂p染實驗、量子點免疫熒光技術(shù)檢測內(nèi)皮型一氧化氮合成酶的蛋白表達以及體外小管形成能力對內(nèi)皮祖細胞進行鑒定；（2）采用不同濃度地塞米松干預內(nèi)皮祖細胞，CCK-8和EdU試劑盒檢測細胞增殖能力、Transwell小室檢測細胞遷移能力、小管形成實驗檢測細胞體外小管形成能力、一氧化氮檢測試劑盒檢測一氧化氮生成濃度；（3）分別使用MAPK/ERK細胞信號通路特異性抑制劑PD98059和PI3K特異性抑制劑LY294002和Wortmannin預先干預內(nèi)皮祖細胞，Western blotting和實時定量RT-PCR檢測糖皮質(zhì)激素對內(nèi)皮祖細胞Akt和eNOS的表達的影響。 【結(jié)果】（1）臍帶血分離的單個核...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1密度梯度離心分離單個核細胞APBS稀釋后臍帶血鋪于人淋巴細胞分離液，界面完整；B離心后可見分為四層，從上至下依次為：血漿層、單個核細胞層、分離液

圖1密度梯度離心分離單個核細胞APBS稀釋后臍帶血鋪于人淋巴細胞分離液，界面完整；B離心后可見分為四層，從上至下依次為：血漿層、單個核細胞層、分離液層和紅細胞層。2內(nèi)皮祖細胞的鑒定2.1內(nèi)皮祖細胞形態(tài)學分離的單個核細胞形態(tài)較小，大小均一，細胞呈圓形；第4天可見....

圖2培養(yǎng)的細胞形態(tài)學觀察A剛分離的單個核細胞形態(tài)較小,圓形,不均勻懸浮分布于培養(yǎng)板底部(×100);B

圖2培養(yǎng)的細胞形態(tài)學觀察A剛分離的單個核細胞形態(tài)較小,圓形,不均勻懸浮分布于培養(yǎng)板底部(×100);B培養(yǎng)第4天可見貼壁細胞形成較多的細胞集落,大小不一,呈發(fā)芽式向外生長(×100);C培養(yǎng)第7天可見細胞形成較大的集落,中心有部分細胞壞死,周圍細胞呈梭形,放射狀....

圖3激光共聚焦顯微鏡下細胞雙染陽性（×400）

20圖3激光共聚焦顯微鏡下細胞雙染陽性（×400）A細胞雙染色陽性；BDAPI標記細胞核呈藍色熒光；C細胞膜結(jié)合FITC標記荊凝集素-1呈綠色熒光；D細胞攝取DIL標記乙酰化低密度脂蛋白呈紅色熒光。2.3小管形成實驗內(nèi)皮祖細胞在Matrigel基....

圖4小管形成實驗內(nèi)皮祖細胞在Matrigel基質(zhì)膠上生長，48h可見細胞互相連接，形成典型的小管狀結(jié)構(gòu)（×100倍）

小管形成實驗內(nèi)皮祖細胞在Matrigel基質(zhì)膠上生長，48h可見細胞型的小管狀結(jié)構(gòu)（×100倍）。量子點免疫熒光檢測內(nèi)皮祖細胞表達內(nèi)皮型一氧化氮合成酶。皮型一氧化氮合成酶位于細胞漿,量子點在545nm激發(fā)波長下顯示紅

本文編號：3974043