研究目的:補(bǔ)體旁路途徑活化或調(diào)節(jié)異常參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展,本研究旨在通過(guò)甘露糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶3(MASP3)基因敲除小鼠模型的建立及抗MASP3單克隆抗體的制備以明確MASP3在補(bǔ)體旁路途徑活化中的作用,并初步探討MASP3能否作為治療旁路途徑功能異常相關(guān)疾病的新靶點(diǎn)。研究方法:1.MASP3基因敲除小鼠的制備和表型初步分析:本研究采用CRISPR Cas9技術(shù)制備了MASP3基因敲除小鼠(MASP3^-/-),將特定的crRNA、tracr RNA和Cas9蛋白注射至小鼠受精卵以敲除小鼠MASP1/3編碼基因第12外顯子的部分序列。因第12外顯子含編碼MASP3絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域的DNA序列,故成功敲除后的小鼠體內(nèi)無(wú)正常MASP3蛋白表達(dá)。在得到F0代小鼠后我們通過(guò)PCR以及DNA測(cè)序篩選出MASP3基因敲除小鼠。為驗(yàn)證MASP3基因部分敲除后小鼠體內(nèi)已無(wú)MASP3蛋白表達(dá),我們制備了兔抗鼠MASP3多克隆抗體(pAb)并通過(guò)western blot檢測(cè)了F0代小鼠體內(nèi)MASP3的表達(dá)情況。隨后我們通過(guò)體外旁路途經(jīng)活性測(cè)定試驗(yàn)和紅細(xì)胞溶解試驗(yàn)檢測(cè)了...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 MASP3基因敲除小鼠模型的構(gòu)建及表型初步分析
    1 材料和方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
第二部分 抗鼠MASP3單克隆抗體的制備和鑒定
    1 材料和方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3967245