目的:通過勻漿大鼠脊髓,利用基于Percoll的密度梯度離心技術(shù),構(gòu)建一種用時(shí)短、分層清晰、穩(wěn)定、高效制備大鼠脊髓突觸體(Synaptosomes,Syn)的方法。方法:用斷頭法將大鼠快速處死,取出除去馬尾部分的脊髓組織,用大量的預(yù)冷的蔗糖/EDTA緩沖液(10ml/g)清洗3次以除去血液成分,濾紙吸干。每克脊髓組織加入9ml預(yù)冷的蔗糖/EDTA緩沖液,置于15ml的預(yù)冷玻璃勻漿器中,輕輕勻漿10次。將勻漿液置于10ml試管中,4℃離心10min,1000g。小心的吸出上清液置于干凈的預(yù)冷試管中,用BCA法測(cè)定上清液蛋白濃度,調(diào)節(jié)蛋白濃度至4-5mg/ml,即S1部分。將2ml S1部分輕輕的加入至3%Percoll分層之上,19500g,離心10min(調(diào)整離心機(jī)加速減速500r/min),將10%Percoll、15%Percoll、23%Percoll分層之間的高密區(qū)(F3、F4)輕輕的吸取出置于干凈的預(yù)冷的離心管中,加入大量的PBS緩沖液,離心10min,14000g,棄上清,3次,4℃保存,將沉淀重懸于PBS中備用。將上述制備的沉淀懸浮液,制備標(biāo)準(zhǔn)電鏡切片,電鏡觀察。運(yùn)用免疫...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2經(jīng)不連續(xù)性Percoll密度梯度離心法離心后分層情況

速的將脊髓組織剪碎，置于預(yù)冷的蔗糖蔗糖/EDTA緩沖液），然后用移液器將上中，上下研磨10次。最后將研磨后的勻管中。觸體的制備3K15-離心機(jī)中，4℃離心10min，3600部分，去除沉淀。置于預(yù)冷的試管中。述S1部分，用BCA蛋白測(cè)定法測(cè)定蛋白白濃度為4-....

圖3A表示一組突觸體,B和C表示附著于突觸前膜的突觸后致密體（PSD），D突觸體（Syn）

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文基于Percoll的大鼠脊髓突觸體的制備第四章實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1電鏡觀察結(jié)果通過電鏡可以清晰的觀察到橢圓形的脊髓突觸體，脊髓突觸體形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，可見突觸體成橢圓形，包膜完整，其內(nèi)含有大量的突觸小泡、單個(gè)或多個(gè)線粒體，突觸前成分、突觸間隙、突觸后致密....

圖4WesternBlot條帶圖

成本實(shí)驗(yàn)不連續(xù)性Percoll方案（%）不連續(xù)性Percoll方案1（%）不連續(xù)性蔗糖方案2（%）不方體71.8±3.25.9±1.81.8±1.218.4±2.370.2±2.23.3±0.62.1±0.724.3±1.54843456010No20F4部分為....

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