目的:探討外層致密纖維(outer dense fobres,ODF)在Akap4基因缺陷引起小鼠精子尾部多種形態(tài)異常中的作用。方法:通過基因編輯技術(shù)構(gòu)建Akap4基因缺陷小鼠模型。實(shí)驗(yàn)分為2組:成年Akap4基因缺陷雄鼠為實(shí)驗(yàn)組(n=7),成年野生型雄鼠為對(duì)照組(n=7),比較2組小鼠的體重和睪丸重量;采用計(jì)算機(jī)輔助精液分析(computer aided sperm analysis,CASA)檢測(cè)精子活動(dòng)力,改良巴氏染色(modified pap staining)檢測(cè)精子形態(tài)學(xué),掃描及透射電鏡觀察精子超微結(jié)構(gòu),免疫熒光檢測(cè)精子尾部蛋白表達(dá)及定位,睪丸切片HE及PAS染色檢測(cè)睪丸生精功能,透射電鏡觀察曲精細(xì)管超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果:Akap4基因缺陷小鼠精子總活動(dòng)力為8.81%,明顯低于野生型小鼠(P<0.01),且無正常形態(tài)精子,尾部縮短與尾部卷曲比例達(dá)91.18%,明顯高于野生型小鼠(P<0.01),睪丸重量、睪丸生精功能、精子數(shù)量2組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01);Akap4基因缺陷精子的纖維鞘縱柱缺失,橫肋柱結(jié)構(gòu)部分殘留,主段的3和8號(hào)ODF排列紊亂,與OD...

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圖1Akap4基因缺失使小鼠精子活動(dòng)力低下

提取敲除小鼠的DNA,利用PCR技術(shù)對(duì)小鼠進(jìn)行基因型鑒定(圖1B)。與WT小鼠對(duì)比,Akap4-KO小鼠精子活動(dòng)力低下(圖1C)。WT與Akap4-KO小鼠精子比較,在A級(jí)快速前向運(yùn)動(dòng)、B級(jí)慢速前向運(yùn)動(dòng)、C級(jí)非前向運(yùn)動(dòng)、D級(jí)極慢或不動(dòng)的比例方面,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,....

圖2Akap4基因缺失使小鼠尾部異常

與WT小鼠對(duì)比,Akap4-KO小鼠精子尾部縮短、卷曲,主段結(jié)構(gòu)紊亂,微管從精子尾部脫離(圖2A)。Akap4-KO小鼠無正常精子,尾部縮短與卷曲的比例達(dá)到91.18%(P<0.01,圖2B)。二者的精子尾部缺失和成角的比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)。與WT小鼠精子掃描電鏡....

圖3Akap4-KO雄性小鼠睪丸超微結(jié)構(gòu)異常

WT小鼠與Akap4-KO小鼠曲精細(xì)管第VIII時(shí)期的HE染色結(jié)果提示兩者生精功能無明顯差異(圖3A),PAS染色也未見明顯差異(圖3B)。與WT小鼠睪丸比較,Akap4-KO小鼠睪丸精子未見FS發(fā)育(圖3C),而ODF無明顯異常。從中段到主段末端的精子橫截面觀察精子尾部附屬結(jié)構(gòu)....

圖4Akap4-KO雄性小鼠精子超微結(jié)構(gòu)異常

圖3Akap4-KO雄性小鼠睪丸超微結(jié)構(gòu)異常3討論

本文編號(hào)：3923594