剛地弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,在人和家畜等中間宿主體內(nèi)可引發(fā)普遍的人畜共患弓形蟲病。據(jù)報(bào)道,全球有多達(dá)20-30%的人感染弓形蟲,且感染后沒有有效的藥物可以根治�？紤]到目前還沒有可使用的弓形蟲疫苗,同時化學(xué)藥物治療將會給人體帶來許多的副作用,故研制一種安全有效的弓形蟲疫苗對控制人類和動物的弓形蟲感染具有十分重要的意義�；诠蜗xMAPK1抗原良好的免疫原性和免疫反應(yīng)性,本次研究我們選用了弓形蟲MAPK1基因構(gòu)建DNA疫苗。目的:構(gòu)建弓形蟲MAPK1抗原的真核表達(dá)質(zhì)粒,制備弓形蟲MAPK1的DNA疫苗,評價(jià)該疫苗所產(chǎn)生的免疫保護(hù)效應(yīng),同時也進(jìn)一步探索MAPK1蛋白作為弓形蟲疫苗候選抗原的可能性。方法:提取弓形蟲RH株的RNA,通過RT-PCR技術(shù)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA,以cDNA作為PCR模板擴(kuò)增出TgMAPK1基因。TgMAPK1基因的膠回收片段與TA克隆載體pEASY-T1連接構(gòu)建重組質(zhì)粒,之后進(jìn)行PCR、雙酶切鑒定并膠回收TgMAPK1基因片段。將上述膠回收產(chǎn)物與真核表達(dá)載體pEGFP-C1連接構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-MAPK1并進(jìn)行PCR、雙酶切及測序鑒定。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＣＲ產(chǎn)物鑒定結(jié)果??Ｍ：?ＤＮＡ標(biāo)記物；１：擴(kuò)增的ＭＡＰＫ１基

圖１?ＰＣＲ產(chǎn)物鑒定結(jié)果??Ｍ：?ＤＮＡ標(biāo)記物；１：擴(kuò)增的ＭＡＰＫ１基Ｆｉｇ．?１?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＭＡＰＫ２．重組質(zhì)粒ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的ＰＣＲ鑒定??以提取的重組....

圖３?ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的雙酶切鑒定??Ｍ：?ＤＮＡ標(biāo)記物；］：重組質(zhì)粒經(jīng)Ｈｉｎｄｌｌｌ和ＢａｍＨ?Ｉ雙酶切

?ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的雙酶切鑒定??Ｍ：?ＤＮＡ標(biāo)記物；］：重組質(zhì)粒經(jīng)Ｈｉｎｄｌｌｌ和Ｂ３?Ｄｉｇｅｓｔｅｄ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｋｅｒ；?１：?Ｔｈｅ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｅｃｏＨ?Ｉ?．??組質(zhì)粒ｐＥＧ....

圖４：?ＭＡＰＫ１基因片段的?

圖４：?ＭＡＰＫ１基因片段的ＢＬＡＳＴ比對結(jié)果??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ＢＬＡＳＴ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＭＡＰＫ１?ｇｅｎｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??５．表達(dá)蛋白的熒光檢測??脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞ＨＥＫ２９３Ｔ，重組質(zhì)粒組（ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ）和??空質(zhì)粒組（ｐＥＧＦＰ－Ｃｌ....

圖５表達(dá)蛋白的熒光檢測??－－

脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞ＨＥＫ２９３Ｔ，重組質(zhì)粒組（ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ）和??空質(zhì)粒組（ｐＥＧＦＰ－Ｃｌ）經(jīng)熒光顯微鏡可觀察到綠色熒光，而空白對照組無熒光呈??現(xiàn)，表明在真核細(xì)胞內(nèi)該重組質(zhì)�？捎行П磉_(dá)，見

本文編號：3911993