剛地弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,在人和家畜等中間宿主體內(nèi)可引發(fā)普遍的人畜共患弓形蟲病。據(jù)報(bào)道,全球有多達(dá)20-30%的人感染弓形蟲,且感染后沒有有效的藥物可以根治�？紤]到目前還沒有可使用的弓形蟲疫苗,同時(shí)化學(xué)藥物治療將會(huì)給人體帶來許多的副作用,故研制一種安全有效的弓形蟲疫苗對(duì)控制人類和動(dòng)物的弓形蟲感染具有十分重要的意義。基于弓形蟲MAPK1抗原良好的免疫原性和免疫反應(yīng)性,本次研究我們選用了弓形蟲MAPK1基因構(gòu)建DNA疫苗。目的:構(gòu)建弓形蟲MAPK1抗原的真核表達(dá)質(zhì)粒,制備弓形蟲MAPK1的DNA疫苗,評(píng)價(jià)該疫苗所產(chǎn)生的免疫保護(hù)效應(yīng),同時(shí)也進(jìn)一步探索MAPK1蛋白作為弓形蟲疫苗候選抗原的可能性。方法:提取弓形蟲RH株的RNA,通過RT-PCR技術(shù)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA,以cDNA作為PCR模板擴(kuò)增出TgMAPK1基因。TgMAPK1基因的膠回收片段與TA克隆載體pEASY-T1連接構(gòu)建重組質(zhì)粒,之后進(jìn)行PCR、雙酶切鑒定并膠回收TgMAPK1基因片段。將上述膠回收產(chǎn)物與真核表達(dá)載體pEGFP-C1連接構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-MAPK1并進(jìn)行PCR、雙酶切及測序鑒定。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＣＲ產(chǎn)物鑒定結(jié)果??Ｍ：?ＤＮＡ標(biāo)記物；１：擴(kuò)增的ＭＡＰＫ１基

圖１?ＰＣＲ產(chǎn)物鑒定結(jié)果??Ｍ：?ＤＮＡ標(biāo)記物；１：擴(kuò)增的ＭＡＰＫ１基Ｆｉｇ．?１?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＭＡＰＫ２．重組質(zhì)粒ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的ＰＣＲ鑒定??以提取的重組....

圖３?ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的雙酶切鑒定??Ｍ：?ＤＮＡ標(biāo)記物；］：重組質(zhì)粒經(jīng)Ｈｉｎｄｌｌｌ和ＢａｍＨ?Ｉ雙酶切

?ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的雙酶切鑒定??Ｍ：?ＤＮＡ標(biāo)記物；］：重組質(zhì)粒經(jīng)Ｈｉｎｄｌｌｌ和Ｂ３?Ｄｉｇｅｓｔｅｄ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｋｅｒ；?１：?Ｔｈｅ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｅｃｏＨ?Ｉ?．??組質(zhì)粒ｐＥＧ....

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圖４：?ＭＡＰＫ１基因片段的ＢＬＡＳＴ比對(duì)結(jié)果??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ＢＬＡＳＴ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＭＡＰＫ１?ｇｅｎｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??５．表達(dá)蛋白的熒光檢測??脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞ＨＥＫ２９３Ｔ，重組質(zhì)粒組（ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ）和??空質(zhì)粒組（ｐＥＧＦＰ－Ｃｌ....

圖５表達(dá)蛋白的熒光檢測??－－

脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞ＨＥＫ２９３Ｔ，重組質(zhì)粒組（ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ）和??空質(zhì)粒組（ｐＥＧＦＰ－Ｃｌ）經(jīng)熒光顯微鏡可觀察到綠色熒光，而空白對(duì)照組無熒光呈??現(xiàn)，表明在真核細(xì)胞內(nèi)該重組質(zhì)�？捎行П磉_(dá)，見

本文編號(hào)：3911993