登革病毒(dengue virus,DENV)屬黃病毒科,黃病毒屬(Flaviviridae),以蚊蟲作為傳播的中間宿主,通過叮咬人引起和傳播登革熱,其中以出現(xiàn)登革出血熱／登革休克綜合征(dengue hemorrhagic fever/dengue shock syndrome,DHF/DSS)更為嚴(yán)重。全球每年約有3億以上人口受威脅,約50萬人可出現(xiàn)癥狀,感染個體中死亡率為1-5%,兒童患者居多。近年來,由于受到全球氣候變暖、生態(tài)環(huán)境惡化、人口移動頻率的增加,使得蚊媒傳播區(qū)域有擴(kuò)散的趨勢,加劇了登革熱流行的范圍和頻率。在我國的海南、廣東、廣西、福建等地也多次出現(xiàn)過登革熱的暴發(fā)流行。世界衛(wèi)生組織將DHF/DSS列為全球性公共衛(wèi)生問題之一。 疫苗接種是預(yù)防傳染性疾病的一種既經(jīng)濟(jì)又有效的預(yù)防和控制手段。雖然登革疫苗的研究已有五十多年的歷史,但是登革熱疫苗的研發(fā)面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)：(1)登革病毒血清型多,因而需要研制能對4種血清型DENV的感染同時提供保護(hù)作用的四價疫苗；(2)登革疫苗要能提供長期的保護(hù)。有研究報道,初次感染20年以后的再感染時仍會發(fā)生DHF。(3)還沒有合適的復(fù)制登革疾病的...

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圖1-1RT-PCR擴(kuò)增的E蛋白全長基因片段Fig.1-1RT-PCRamplificationofEnvelopproteinDNAfragment

T中平衡20min后，在半干轉(zhuǎn)印儀中經(jīng)半干轉(zhuǎn)PVDF膜放入以50g/L脫脂奶粉的封閉液中1h。Tag單克隆抗體（1: 2500稀釋），37°C孵育2h。T洗漆膜6次，每次5 min。加入HRP標(biāo)記的羊抗小育Ih。T洗漆膜6次，每次5min。按照增強(qiáng)型HRP-DAB結(jié)果，顯色....

圖1-2重組質(zhì)粒pET-32a⑴-DV2-EDIII的酶切鑒定Fig.1-2IdentificationofplasmidpET-32a(+)-DV2-EDIIIbyrestrictionenzymesdigestion

第一章登革II型病毒EDin蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備32a-EDIII重組質(zhì)粒雙酶切、PCR及核苷酸測序鑒定)PCR純化的DENV-EDIII產(chǎn)物克隆至pMD18-T載體；（2)雙酶切回收純化目的條帶；（3)與經(jīng)同樣雙酶切的pET32a質(zhì)連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5a細(xì)菌感受態(tài)....

圖1-4重組菌BL2丨(DE3)/pET-32a(+)-DV2-EDm表達(dá)的SDS-PAGE分析

第一章登革II型病毒EDin蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備3.3pET32a-EDIII/BL21(DE3)重組菌融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及表達(dá)形式的鑒重組質(zhì)粒pET-28a(+)-DV2-EDlII轉(zhuǎn)化5Z27(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)Immol/IPTG分別選擇37°C和16°....

圖1-5對]激酶水解1:腸激酶水解后2:純化的重組融合蛋白

博士學(xué)位論文Lane6:PelletofBL21(DE3)/pET-32a(+)-DV2-EDniaftersonicatioLane7:PurifiedrecombinantproteinwithNi-NTAHis'BindResin;腸激酶酶切融合蛋白....

本文編號：3894829