[目的]微小RNA(microRNA,miRNA)是一類對基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控的小分子非編碼RNA。近年來,在植物、哺乳動(dòng)物、果蠅、線蟲以及病毒中都發(fā)現(xiàn)有大量的miRNA存在且廣泛的參與各種生理和病理過程,但是在原核生物中是否也包含miRNA尚未見報(bào)道。本研究利用分子生物學(xué)技術(shù),生物信息學(xué)探索結(jié)核桿菌中是否存在miRNA,并確定其在結(jié)核桿菌的生長過程中所發(fā)揮的作用,進(jìn)而對原核生物中miRNA的加工機(jī)制做了初步探討。[方法]首先用超聲法提取結(jié)核桿菌的總RNA,然后將小RNA分離,通過Solexa測序,得到克隆出的小RNA序列信息。隨后運(yùn)用生物信息學(xué)軟件Mireap對得到的小RNA用軟件進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)的預(yù)測,觀測其是否有特定的二級結(jié)構(gòu)前體。利用Northern Blot方法驗(yàn)證在結(jié)核桿菌中是否存在預(yù)測到的序列。通過Real-time PCR技術(shù)檢測這些miRNAs的內(nèi)源性表達(dá)水平。利用電轉(zhuǎn)化的方法將內(nèi)源性miRNAs封閉或過表達(dá)其前體的表達(dá)水平,觀察其在結(jié)核桿菌增殖過程中所發(fā)揮的調(diào)控作用。最后利用熒光報(bào)告系統(tǒng)確定其靶基因。[結(jié)果]Solexa測序結(jié)果顯示,在BCG中存在388種已知miRN...

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【學(xué)位級別】：碩士

圖１．１?Ｓｏｌｅｘａ測序�。遥危灵L度分布??

圖１．５?ｍｉＲＮＡ堿基偏愛性分析??（Ａ）新的ｍｉＲＮＡ在每個(gè)堿基上的偏愛性??

圖２．１?ｐＹＬ２－ＧＦＰ質(zhì)粒圖譜??３２??

圖2:2過表達(dá)acc-mix-o}和BCG-miR-21后菌體內(nèi)相應(yīng)mRrra水平檢}9AB

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