[目的]微小RNA(microRNA,miRNA)是一類對基因進行轉錄后水平調控的小分子非編碼RNA。近年來,在植物、哺乳動物、果蠅、線蟲以及病毒中都發(fā)現(xiàn)有大量的miRNA存在且廣泛的參與各種生理和病理過程,但是在原核生物中是否也包含miRNA尚未見報道。本研究利用分子生物學技術,生物信息學探索結核桿菌中是否存在miRNA,并確定其在結核桿菌的生長過程中所發(fā)揮的作用,進而對原核生物中miRNA的加工機制做了初步探討。[方法]首先用超聲法提取結核桿菌的總RNA,然后將小RNA分離,通過Solexa測序,得到克隆出的小RNA序列信息。隨后運用生物信息學軟件Mireap對得到的小RNA用軟件進行二級結構的預測,觀測其是否有特定的二級結構前體。利用Northern Blot方法驗證在結核桿菌中是否存在預測到的序列。通過Real-time PCR技術檢測這些miRNAs的內源性表達水平。利用電轉化的方法將內源性miRNAs封閉或過表達其前體的表達水平,觀察其在結核桿菌增殖過程中所發(fā)揮的調控作用。最后利用熒光報告系統(tǒng)確定其靶基因。[結果]Solexa測序結果顯示,在BCG中存在388種已知miRN...

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圖１．１?Ｓｏｌｅｘａ測序�。遥危灵L度分布??

圖１．５?ｍｉＲＮＡ堿基偏愛性分析??（Ａ）新的ｍｉＲＮＡ在每個堿基上的偏愛性??

圖２．１?ｐＹＬ２－ＧＦＰ質粒圖譜??３２??

圖2:2過表達acc-mix-o}和BCG-miR-21后菌體內相應mRrra水平檢}9AB

本文編號：3886354