目的：本課題利用體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVECS),觀察ANGⅡ處理下,細(xì)胞內(nèi)JNK/c-Jun通路的激活情況,并 通過(guò)抑制JNK/c-Jun通路,觀察下游SREBP-1、DDAH-1蛋白質(zhì)水平的變化及ADMA和NO水平的變化,從而探討JNK通路在ANG Ⅱ影響DDAH/ADMA/NOS系統(tǒng)中的作用,為闡明ANG Ⅱ引起NO水平變化提供新的視角。 方法：體外培養(yǎng)細(xì)胞株HUVECs,同步化處理后,加入不同濃度的ANG Ⅱ,孵育24小時(shí),用Western blot檢測(cè)p-JNK, p-c-Jun表達(dá)水平的改變,從而觀察有無(wú)JNK/c-Jun信號(hào)通路的激活。以最大程度激活JNK/c-Jun通路的ANG Ⅱ處理濃度為最佳處理濃度。加入上述最佳處理濃度的ANG Ⅱ處理HUVECS不同時(shí)間,用Western blot檢測(cè)p-JNK, p-c-Jun表達(dá)水平的改變,找出可以最大程度激活JNK通路的ANG Ⅱ最佳處理時(shí)間。用以上最佳處理濃度與處理時(shí)間的ANG Ⅱ處理HUVECs,用Western Blot檢測(cè)p-c-...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 對(duì)象,試劑及儀器
        2.1.1對(duì)象：人擠靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株（HUVECS)購(gòu)于中南大學(xué)細(xì)胞中心
        2.1.2試劑
        2.1.3主要試劑的配置
    2.2 方法
        2.2.1 人肪靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株（HUVECS)的培養(yǎng)
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.3 p-JNK/p-c-Jun 蛋白水平測(cè)定(Western Blotting)
        2.2.4 JNK阻斷劑SP600125處理HUVECS并分組
        2.2.5 Western blot 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi) p-c-Jun，SREBP-1, DDAH-1 蛋白表達(dá)
        2.2.6 細(xì)胞培養(yǎng)液上清中ADMA的測(cè)定（高效液相色譜法）
        2.2.7 HUVECS中DDAH酶活性測(cè)定
        2.2.8 細(xì)胞培養(yǎng)液上清NO測(cè)定（銷酸還原酶法)
            2.2.8.1基本原理
            2.2.8.2 試齊ij
            2.2.8.3 操作過(guò)程
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果
    3.1 不同濃度ANGⅡ處理下,HUVECS中JNK通路及下游C-JUN激活的情況
    3.2 不同ANGⅡ處理時(shí)間下,HUVECS中JNK通路及下游C-JUN激活的情況
    3.3 JNK抑制劑SP600125對(duì)HUVECS中SREBP-1的表達(dá)的影響
    3.4 JNK抑制劑SP600125對(duì)HUVECS中DDAH-1的表達(dá)的影響
    3.5 JNK抑制劑SP600125對(duì)HUVECS上清液中ADMA含量的影響
    3.6 JNK抑制劑SP600125對(duì)HUVECS中DDAH酶活性的影響
    3.7 JNK抑制劑SP600125對(duì)HUVECS上清液中NO含量的影響
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3885958