第一部分噬菌體展示HIV-1 Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體庫的構(gòu)建 目的用噬菌體展示的方法構(gòu)建Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫,進一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子進化篩選。方法采用含隨機核苷酸序列的引物,通過Overlap PCR的方法獲得51和55位氨基酸隨機突變的全長Tat編碼序列,再以此為模板PCR擴增出兩端含有Xba I識別序列的Tat38-61突變體片段HIV-1 Tat38-61(51N/55N),克隆至噬菌體展示載體pCANTAB5S上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1,經(jīng)M13K07輔助噬菌體拯救,構(gòu)建噬菌體展示Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫。結(jié)果成功構(gòu)建噬菌體展示Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫,結(jié)果顯示文庫的庫容量為5.0×10⁶,滴度為2.65×10¹² TU/ml,陽性克隆率為56.50%;序列分析顯示文庫中51、55位核苷酸與氨基酸均呈隨機性分布。結(jié)論所建文庫達到進行分子進化篩選的要求,為獲得可用作疫苗候選物的新型Tat突變體奠定基礎(chǔ)。 第二部...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分：HIV-1 Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫的構(gòu)建
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分：HIV-1 Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫的親和篩選
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分：HIV-1 Tat38-61(51N/55N)突變體蛋白的構(gòu)建表達
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
總結(jié)
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3860322