目的建立一個(gè)有效表達(dá)FGFR1的真核系統(tǒng)。方法從人胎盤組織提取總RNA,通過RT-PCR擴(kuò)增得到FGFR1基因,并將其克隆到真核表達(dá)載體pcDNA3.1上,構(gòu)建成pcDNA3.1-FGFR1質(zhì)粒表達(dá)載體,并在HEK293T細(xì)胞重組表達(dá);將pcDNA3.1-FGFR1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,通過免疫印跡和免疫熒光檢測(cè)FGFR1在細(xì)胞中的表達(dá)情況。結(jié)果擴(kuò)增的FGFR1序列與數(shù)據(jù)庫(kù)一致;通過構(gòu)建表達(dá)載體和轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)現(xiàn)了FGFR1c DNA在HEK293T細(xì)胞膜上的表達(dá)。結(jié)論成功擴(kuò)增出FGFR1 c DNA基因,經(jīng)過轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)了FGFR1在HEK293T細(xì)胞的高效表達(dá)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 試劑
        1.1.2 引物設(shè)計(jì)及合成
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 FGFR1基因的克隆
        1.2.2 pcDNA3.1-FGFR1
        1.2.3細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染
        1.2.4 免疫印跡檢測(cè)FGFR1基因在HEK293T細(xì)胞中的表達(dá)
        1.2.5免疫熒光檢測(cè)FGFR1基因在HEK293T細(xì)胞中的表達(dá)
2 結(jié)果
    2.1 提取完整的人胎盤組織總RNA
    2.2 克隆FGFR1基因
    2.3 正確構(gòu)建pcDNA3.1-FGFR1真核表達(dá)質(zhì)粒
    2.4 免疫印跡分析FGFR1基因在HEK293T細(xì)胞中的高效表達(dá)
    2.5 免疫熒光分析FGFR1基因在HEK293T細(xì)胞中的高效表達(dá)
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