本文運(yùn)用原子轉(zhuǎn)移自由基聚合技術(shù)一鍋法合成了以聚N, N’-雙(丙烯酰)胱胺(PBAC)為交聯(lián)核,以線性聚甲基丙烯酸-N, N’-二甲氨基乙酯(l-PDMAEMA)為臂的星形陽(yáng)離子聚合物s-PDMAEMA。在二硫代蘇糖醇(DTT)還原條件下,s-PDMAEMA顯示了可降解能力。s-PDMAEMA聚合物具有比l-PDMAEMA更強(qiáng)的壓縮DNA能力。s-PDMAEMA具有優(yōu)于其對(duì)應(yīng)線性l-PDMAEMA的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率,s-PDMAEMA200的轉(zhuǎn)染效果高于PEI25kDa,且毒性更低。通過(guò)酸堿滴定實(shí)驗(yàn)考察了l-PDMAEMA、s-PDMAEMA載體的質(zhì)子緩沖效應(yīng)。采用AFM觀察不同pH對(duì)l-PDMAEMA/DNA、s-PDMAEMA/DNA復(fù)合物形貌的影響。以時(shí)間相關(guān)熒光光譜技術(shù)考察了l-PDMAEMA/DNA、s-PDMAEMA/DNA的核酸降解酶穩(wěn)定性。結(jié)果表明,交聯(lián)結(jié)構(gòu)聚合物分子內(nèi)部滲透壓提高,星形聚合物表現(xiàn)出了比線性聚合物更強(qiáng)的質(zhì)子緩沖能力。當(dāng)環(huán)境pH值從7.4降到5.0,l-PDMAEMA/DNA復(fù)合物變得更為緊密;相反,由于帶正電的臂向外部伸展,s-PDMAEMA/DNA復(fù)合物呈...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 概述
    1.2 非病毒基因載體
        1.2.1 陽(yáng)離子脂質(zhì)體（Liposome）
        1.2.2 聚乙烯亞胺（PEI）
        1.2.3 樹(shù)枝狀聚合物載體（Dendrimers）
        1.2.4 聚賴氨酸（PLL）
        1.2.5 聚甲基丙烯酸-N, N’-二甲氨基乙酯（PDMAEMA）
    1.3 聚陽(yáng)離子載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程及面臨屏障
        1.3.1 復(fù)合物的形成
        1.3.2 復(fù)合物的血液輸送穩(wěn)定性
        1.3.3 復(fù)合物穿越血管內(nèi)皮層及細(xì)胞外基質(zhì)
        1.3.4 復(fù)合物的細(xì)胞攝取
        1.3.5 復(fù)合物的內(nèi)涵體逃逸
        1.3.6 復(fù)合物的細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.3.7 細(xì)胞核定位
    1.4 提高聚陽(yáng)離子載體基因轉(zhuǎn)運(yùn)效率的方法
        1.4.1 提高復(fù)合物的血液輸送穩(wěn)定性
        1.4.2 靶向細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.4.3 提高復(fù)合物逃離內(nèi)涵體/溶酶體效果
        1.4.4 提高基因物質(zhì)細(xì)胞質(zhì)釋放效果
        1.4.5 提高DNA的細(xì)胞核運(yùn)輸效果
    1.5 課題的提出及研究?jī)?nèi)容
第二章 星型PDMAEMA聚合物作為基因載體的應(yīng)用
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 原料與試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 星型PDMAEMA聚合物的合成
        2.2.4 傅立葉變換紅外光譜檢測(cè)
        2.2.5 凝膠滲透色譜檢測(cè)
        2.2.6 二硫鍵含量的測(cè)定
        2.2.7 降解實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 菌體的培養(yǎng)與質(zhì)粒DNA的提取
        2.2.9 聚合物/DNA復(fù)合物的制備
        2.2.10 聚合物/DNA復(fù)合物形貌
        2.2.11 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.12 毒性試驗(yàn)
        2.2.13 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.14 熒光素酶活性測(cè)定
        2.2.15 BCA法測(cè)總蛋白
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 星型聚合物的合成及結(jié)構(gòu)表征
        2.3.2 聚合物的分子量及其分布
        2.3.3 星型聚合物的二硫鍵含量測(cè)定
        2.3.4 星型聚合物降解性能考察
        2.3.5 瓊脂糖凝膠電泳
        2.3.6 聚合物/DNA復(fù)合物的尺寸及形貌
        2.3.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3.8 細(xì)胞毒性
    2.4 本章小結(jié)
第三章 星形PDMAEMA載體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的機(jī)理研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 原料與試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 滴定實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 聚合物/DNA復(fù)合物的制備
        3.2.5 聚合物/DNA復(fù)合物的形貌
        3.2.6 時(shí)間分辨熒光分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 聚合物質(zhì)子緩沖能力
        3.3.2 聚合物/DNA復(fù)合物的形貌
        3.3.3 時(shí)間分辨熒光研究
    3.4 本章小結(jié)
第四章 PDMAEMA-PMPDSAH共聚物作為基因載體的應(yīng)用
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 原料與試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 PDMAEMA-PMPDSAH嵌段共聚物的合成
        4.2.4 聚合物的表征
        4.2.5 質(zhì)粒DNA的提取過(guò)程
        4.2.6 聚合物/DNA復(fù)合物的制備
        4.2.7 聚合物/DNA復(fù)合物形貌觀察
        4.2.8 瓊脂糖凝膠電泳
        4.2.9 Zeta電位和粒度測(cè)量
        4.2.10 毒性試驗(yàn)
        4.2.11 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.12 熒光素酶活性測(cè)定
        4.2.13 BCA法測(cè)總蛋白含量
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 PDMAEMA200-PMPDSAHx嵌段共聚物的合成及表征
        4.3.2 凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
        4.3.3 聚合物/DNA復(fù)合物的形貌
        4.3.4 復(fù)合物的zeta電位及粒度
        4.3.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.3.6 毒性實(shí)驗(yàn)
    4.4 本章小結(jié)
第五章 PDMAEMA-PMPDSAH載體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的機(jī)理研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)部分
        5.2.1 原料與試劑
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.2.3 PDMAEMA200-PMPC80嵌段共聚物的合成
        5.2.4 聚合物的結(jié)構(gòu)表征
        5.2.5 質(zhì)粒DNA的提取
        5.2.6 聚合物/DNA復(fù)合物的制備
        5.2.7 瓊脂糖凝膠電泳
        5.2.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.2.9 熒光素酶活性測(cè)定
        5.2.10 BCA法測(cè)總蛋白含量
        5.2.11 細(xì)胞內(nèi)化效率測(cè)定
        5.2.12 動(dòng)態(tài)接觸角測(cè)量
        5.2.13 差示掃描量熱分析
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 PDMAEMA200-PMPC80嵌段共聚物的合成
        5.3.2 凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
        5.3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.3.4 聚合物/DNA復(fù)合物的細(xì)胞內(nèi)化效果研究
        5.3.5 動(dòng)態(tài)接觸角測(cè)量
        5.3.6 聚合物與二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC）的相互作用
    5.4 本章小結(jié)
第六章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明
致謝



本文編號(hào)：3805116