本文運用原子轉(zhuǎn)移自由基聚合技術(shù)一鍋法合成了以聚N, N’-雙(丙烯酰)胱胺(PBAC)為交聯(lián)核,以線性聚甲基丙烯酸-N, N’-二甲氨基乙酯(l-PDMAEMA)為臂的星形陽離子聚合物s-PDMAEMA。在二硫代蘇糖醇(DTT)還原條件下,s-PDMAEMA顯示了可降解能力。s-PDMAEMA聚合物具有比l-PDMAEMA更強的壓縮DNA能力。s-PDMAEMA具有優(yōu)于其對應(yīng)線性l-PDMAEMA的細胞轉(zhuǎn)染效率,s-PDMAEMA200的轉(zhuǎn)染效果高于PEI25kDa,且毒性更低。通過酸堿滴定實驗考察了l-PDMAEMA、s-PDMAEMA載體的質(zhì)子緩沖效應(yīng)。采用AFM觀察不同pH對l-PDMAEMA/DNA、s-PDMAEMA/DNA復(fù)合物形貌的影響。以時間相關(guān)熒光光譜技術(shù)考察了l-PDMAEMA/DNA、s-PDMAEMA/DNA的核酸降解酶穩(wěn)定性。結(jié)果表明,交聯(lián)結(jié)構(gòu)聚合物分子內(nèi)部滲透壓提高,星形聚合物表現(xiàn)出了比線性聚合物更強的質(zhì)子緩沖能力。當環(huán)境pH值從7.4降到5.0,l-PDMAEMA/DNA復(fù)合物變得更為緊密;相反,由于帶正電的臂向外部伸展,s-PDMAEMA/DNA復(fù)合物呈...

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 概述
    1.2 非病毒基因載體
        1.2.1 陽離子脂質(zhì)體（Liposome）
        1.2.2 聚乙烯亞胺（PEI）
        1.2.3 樹枝狀聚合物載體（Dendrimers）
        1.2.4 聚賴氨酸（PLL）
        1.2.5 聚甲基丙烯酸-N, N’-二甲氨基乙酯（PDMAEMA）
    1.3 聚陽離子載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)運過程及面臨屏障
        1.3.1 復(fù)合物的形成
        1.3.2 復(fù)合物的血液輸送穩(wěn)定性
        1.3.3 復(fù)合物穿越血管內(nèi)皮層及細胞外基質(zhì)
        1.3.4 復(fù)合物的細胞攝取
        1.3.5 復(fù)合物的內(nèi)涵體逃逸
        1.3.6 復(fù)合物的細胞質(zhì)轉(zhuǎn)運
        1.3.7 細胞核定位
    1.4 提高聚陽離子載體基因轉(zhuǎn)運效率的方法
        1.4.1 提高復(fù)合物的血液輸送穩(wěn)定性
        1.4.2 靶向細胞轉(zhuǎn)染
        1.4.3 提高復(fù)合物逃離內(nèi)涵體/溶酶體效果
        1.4.4 提高基因物質(zhì)細胞質(zhì)釋放效果
        1.4.5 提高DNA的細胞核運輸效果
    1.5 課題的提出及研究內(nèi)容
第二章 星型PDMAEMA聚合物作為基因載體的應(yīng)用
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 原料與試劑
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 星型PDMAEMA聚合物的合成
        2.2.4 傅立葉變換紅外光譜檢測
        2.2.5 凝膠滲透色譜檢測
        2.2.6 二硫鍵含量的測定
        2.2.7 降解實驗
        2.2.8 菌體的培養(yǎng)與質(zhì)粒DNA的提取
        2.2.9 聚合物/DNA復(fù)合物的制備
        2.2.10 聚合物/DNA復(fù)合物形貌
        2.2.11 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.12 毒性試驗
        2.2.13 細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.14 熒光素酶活性測定
        2.2.15 BCA法測總蛋白
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 星型聚合物的合成及結(jié)構(gòu)表征
        2.3.2 聚合物的分子量及其分布
        2.3.3 星型聚合物的二硫鍵含量測定
        2.3.4 星型聚合物降解性能考察
        2.3.5 瓊脂糖凝膠電泳
        2.3.6 聚合物/DNA復(fù)合物的尺寸及形貌
        2.3.7 細胞轉(zhuǎn)染
        2.3.8 細胞毒性
    2.4 本章小結(jié)
第三章 星形PDMAEMA載體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的機理研究
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 原料與試劑
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 滴定實驗
        3.2.4 聚合物/DNA復(fù)合物的制備
        3.2.5 聚合物/DNA復(fù)合物的形貌
        3.2.6 時間分辨熒光分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 聚合物質(zhì)子緩沖能力
        3.3.2 聚合物/DNA復(fù)合物的形貌
        3.3.3 時間分辨熒光研究
    3.4 本章小結(jié)
第四章 PDMAEMA-PMPDSAH共聚物作為基因載體的應(yīng)用
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 原料與試劑
        4.2.2 實驗儀器
        4.2.3 PDMAEMA-PMPDSAH嵌段共聚物的合成
        4.2.4 聚合物的表征
        4.2.5 質(zhì)粒DNA的提取過程
        4.2.6 聚合物/DNA復(fù)合物的制備
        4.2.7 聚合物/DNA復(fù)合物形貌觀察
        4.2.8 瓊脂糖凝膠電泳
        4.2.9 Zeta電位和粒度測量
        4.2.10 毒性試驗
        4.2.11 細胞轉(zhuǎn)染
        4.2.12 熒光素酶活性測定
        4.2.13 BCA法測總蛋白含量
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 PDMAEMA200-PMPDSAHx嵌段共聚物的合成及表征
        4.3.2 凝膠電泳實驗
        4.3.3 聚合物/DNA復(fù)合物的形貌
        4.3.4 復(fù)合物的zeta電位及粒度
        4.3.5 細胞轉(zhuǎn)染
        4.3.6 毒性實驗
    4.4 本章小結(jié)
第五章 PDMAEMA-PMPDSAH載體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的機理研究
    5.1 引言
    5.2 實驗部分
        5.2.1 原料與試劑
        5.2.2 實驗儀器
        5.2.3 PDMAEMA200-PMPC80嵌段共聚物的合成
        5.2.4 聚合物的結(jié)構(gòu)表征
        5.2.5 質(zhì)粒DNA的提取
        5.2.6 聚合物/DNA復(fù)合物的制備
        5.2.7 瓊脂糖凝膠電泳
        5.2.8 細胞轉(zhuǎn)染
        5.2.9 熒光素酶活性測定
        5.2.10 BCA法測總蛋白含量
        5.2.11 細胞內(nèi)化效率測定
        5.2.12 動態(tài)接觸角測量
        5.2.13 差示掃描量熱分析
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 PDMAEMA200-PMPC80嵌段共聚物的合成
        5.3.2 凝膠電泳實驗
        5.3.3 細胞轉(zhuǎn)染
        5.3.4 聚合物/DNA復(fù)合物的細胞內(nèi)化效果研究
        5.3.5 動態(tài)接觸角測量
        5.3.6 聚合物與二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC）的相互作用
    5.4 本章小結(jié)
第六章 全文結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
致謝



本文編號：3805116