目的:通過(guò)激活自身免疫系統(tǒng)識(shí)別并清除腫瘤細(xì)胞的腫瘤免疫療法成為近年來(lái)臨床上治療惡性腫瘤的一項(xiàng)新策略。隨著納米科技的發(fā)展,納米顆粒介導(dǎo)的疫苗即納米疫苗已成為越來(lái)越重要的一個(gè)研究領(lǐng)域。納米顆粒除了可以保護(hù)所載抗原免受體液中各種酶的降解及作為抗原儲(chǔ)存池的作用外,還可以通過(guò)靶向修飾將抗原精準(zhǔn)地輸送至免疫細(xì)胞。近幾年來(lái),研究證實(shí)通過(guò)時(shí)空控制編排,借助納米顆粒還可以改變抗原在免疫細(xì)胞內(nèi)的遞呈通路,誘導(dǎo)產(chǎn)生特定的免疫反應(yīng),如促進(jìn)納米疫苗負(fù)載的抗原從溶酶體逃逸至胞漿后通過(guò)MHC-Ⅰ途徑提呈即交叉呈遞,激活抗原特異的細(xì)胞毒性T細(xì)胞免疫反應(yīng)。本研究分別將具有跨膜作用的細(xì)胞穿透肽MPG△NLS和具有干擾溶酶體膜穩(wěn)定性作用的羥基氯喹HCQ引入納米疫苗中,以增強(qiáng)抗原從溶酶體逃逸至胞漿中通過(guò)交叉呈遞,誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗原特異的細(xì)胞免疫反應(yīng),尤其是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。方法:MPG△NLS介導(dǎo)的納米疫苗是首先將細(xì)胞穿膜肽MPG△NLS與模型抗原OVA以二硫鍵共價(jià)連接,然后采用兩步乳化法將其包裹在PLGA納米顆粒中制備而成(MPG△NLS-OVA-PLGANPs);HCQ介導(dǎo)的納米疫苗是采用PLGA直接包裹HCQ與OV...

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
    1. 腫瘤免疫治療
    2. 腫瘤疫苗
    3. 納米疫苗載體
    4. 溶酶體逃逸與抗原交叉提呈
    5. 課題的提出
    參考文獻(xiàn)
第一部分 MPG^△NLS-OVA-PLGA腫瘤納米疫苗的研究
    前言
        參考文獻(xiàn)
    第1章 MPG^△NLS-OVA的合成與表征
        1.1 本章引論
        1.2 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2.1 主要試劑
            1.2.2 主要儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 MPG^△NLS-OVA的合成方法
            1.3.2 MPG^△NLS-OVA的共價(jià)連接驗(yàn)證
        1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1.4.1 MPG^△NLS-OVA的合成路線(xiàn)
            1.4.2 熒光光譜
        1.5 討論與小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第2章 MPG^△NLS-OVA-PLGA納米疫苗的制備與表征
        2.1 本章引論
        2.2 實(shí)驗(yàn)材料
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的制備方法
            2.3.2 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的表征
            2.3.3 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的蛋白包封率檢測(cè)
            2.3.4 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的蛋白釋放情況
        2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.4.1 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs掃描電鏡圖像
            2.4.2 納米粒的粒徑與Zeta電位
            2.4.3 納米粒的蛋白包封率
            2.3.4 納米粒的體外蛋白累積釋放率
        2.5 討論與小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第3章 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的體外免疫效應(yīng)研究
        3.1 本章引論
        3.2 實(shí)驗(yàn)材料
            3.2.1 主要試劑
            3.2.2 主要儀器
        3.3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.3.1 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的體外攝取
            3.3.2 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs對(duì)抗原提呈細(xì)胞成熟的刺激作用研究
        3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.4.1 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的體外攝取情況
            3.4.2 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs對(duì)抗原提呈細(xì)胞成熟的刺激作用
        3.5 討論與小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第4章 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs納米疫苗的體內(nèi)免疫評(píng)價(jià)
        4.1 本章引論
        4.2 實(shí)驗(yàn)材料
            4.2.1 主要試劑
            4.2.2 主要儀器
        4.3 實(shí)驗(yàn)方法
            4.3.1 小鼠體內(nèi)免疫流程
            4.3.2 小鼠血清IgG含量ELISA分析
            4.3.3 細(xì)胞內(nèi)IFN-γ染色
            4.3.4 流式細(xì)胞術(shù)評(píng)價(jià)免疫小鼠的T細(xì)胞應(yīng)答
            4.3.5 腫瘤模型小鼠腫瘤體積與生存期
        4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            4.4.1 免疫小鼠血清抗體含量的ELISA分析
            4.4.2 免疫小鼠細(xì)胞內(nèi)IFN-γ含量檢測(cè)
            4.4.3 納米疫苗免疫正常小鼠后的T細(xì)胞免疫應(yīng)答
            4.4.4 腫瘤模型小鼠的腫瘤體積與生存期
        4.5 討論與小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第一部分 小結(jié)
第二部分 羥基氯喹介導(dǎo)的腫瘤納米疫苗的研究
    前言
        參考文獻(xiàn)
    第1章 HCQ-OVA-PLGA NPs的制備與表征
        1.1 本章引論
        1.2 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2.1 主要試劑
            1.2.2 主要儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 HCQ-OVA-PLGA NPs的制備方法
            1.3.2 HCQ-OVA-PLGA NPs的表征
            1.3.3 HCQ-OVA-PLGA NPs的蛋白包封率檢測(cè)
            1.3.4 HCQ-OVA-PLGA NPs的蛋白釋放情況
        1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1.4.1 納米粒的透射電鏡圖像
            1.4.2 納米粒的粒徑與Zeta電位
            1.4.3 納米粒的蛋白包封率
            1.4.4 納米粒的體外蛋白累積釋放率
        1.5 討論與小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第2章 HCQ-OVA-PLGA NPs的體外免疫效應(yīng)評(píng)價(jià)
        2.1 本章引論
        2.2 實(shí)驗(yàn)材料
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 HCQ-OVA-PLGA NPs的體外攝取
            2.3.2 HCQ-OVA-PLGA NPs對(duì)抗原提呈細(xì)胞成熟的刺激作用研究
        2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.4.1 HCQ-OVA-PLGA NPs的體外攝取情況
            2.4.2 HCQ-OVA-PLGA NPs對(duì)抗原提呈細(xì)胞成熟的刺激作用
        2.5 討論與小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第3章 HCQ-OVA-PLGA納米疫苗的體內(nèi)免疫評(píng)價(jià)
        3.1 本章引論
        3.2 實(shí)驗(yàn)材料
            3.2.1 動(dòng)物與細(xì)胞
            3.2.2 主要試劑
            3.2.3 主要儀器
        3.3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.3.1 小鼠腫瘤模型的建立
            3.3.2 腫瘤模型小鼠體內(nèi)免疫流程
            3.3.3 小鼠血清IgG含量的ELISA分析
            3.3.4 細(xì)胞內(nèi)IFN-γ染色
            3.3.5 流式細(xì)胞術(shù)評(píng)價(jià)免疫小鼠的T細(xì)胞應(yīng)答
            3.3.6 腫瘤組織學(xué)分析
        3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.4.1 小鼠的腫瘤體積變化與生存期
            3.4.2 血清IgG含量的ELISA分析
            3.4.3 脾免疫細(xì)胞內(nèi)IFN-γ的表達(dá)
            3.4.4 淋巴結(jié)T細(xì)胞免疫應(yīng)答的類(lèi)型
            3.4.5 記憶T細(xì)胞應(yīng)答
            3.4.6 腫瘤組織病理學(xué)分析
        3.5 討論與小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
第二部分 小結(jié)
全文總結(jié)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3793130