間充質(zhì)干細(xì)胞是一類來源廣泛的多能干細(xì)胞,隨著其在組織工程和再生醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用,對于在規(guī)模化制備、低溫儲存過程中建立嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定檢測體系,確保培養(yǎng)的細(xì)胞群體的安全性和達(dá)到預(yù)期用途也提出越來越高的要求,而國內(nèi)外對于MSCs培養(yǎng)過程尚未有統(tǒng)一的質(zhì)量鑒定檢測標(biāo)準(zhǔn)體系。本課題基于深圳國家基因庫細(xì)胞資源庫的建設(shè),研究建立四種來源間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSCs、PD-MSCs、DP-MSCs、A-MSCs)質(zhì)量控制工藝,通過采集健康足月新生兒廢棄臍帶、胎盤組織、7-10歲兒童乳牙、20-30年齡段腹部抽脂棄用脂肪組織,采用組織塊貼壁法(UC-MSCs)、酶消化法(PD-MSCs、DP-MSCs、A-MSCs)進(jìn)行體外細(xì)胞分離并擴(kuò)增至P2代凍存;制備過程中進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞數(shù)量及活力測定其生長狀態(tài);供者進(jìn)行傳染病篩查來源安全性;在原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、細(xì)胞凍存進(jìn)行支原體、需厭氧及真菌、細(xì)菌內(nèi)毒素檢測培養(yǎng)過程安全性;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞純度;STR抽樣檢測細(xì)胞間無交叉污染;向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞分化抽樣檢測其分化傾向性,同時(shí)通過RT-PCR檢測成骨RUNX2、OCN基因、成軟骨SOX9、COL2...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 研究背景
    1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞及其主要特征
        1.1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞的定義
        1.1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞來源
        1.1.3 間充質(zhì)干細(xì)胞特征
    1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用
        1.2.2 間充質(zhì)干細(xì)胞國內(nèi)外臨床研究進(jìn)展
    1.3 間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量控制研究現(xiàn)狀及其存在的問題
    1.4 本研究的意義與內(nèi)容
        1.4.1 本研究的意義
        1.4.2 研究的內(nèi)容
        1.4.3 研究路線
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 樣本材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)步驟與方法
        2.2.1 試劑配制
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 細(xì)胞凍存
        2.2.4 質(zhì)量檢測
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 供體篩查
        3.1.1 人源特定病毒檢測
    3.2 原代組織分離、細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果分析
        3.2.1 支原體檢測
        3.2.2 需、厭氧及真菌檢測
    3.3 細(xì)胞凍存結(jié)果分析
        3.3.1 細(xì)胞活力
        3.3.2 細(xì)胞形態(tài)
        3.3.3 需、厭氧及真菌檢測
        3.3.4 支原體檢測
        3.3.5 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測
        3.3.6 間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原結(jié)果
    3.4 間充質(zhì)干細(xì)胞STR圖譜結(jié)果分析
    3.5 四種來源間充質(zhì)干細(xì)胞分化傾向性分析
        3.5.1 成骨分化結(jié)果分析
        3.5.2 成軟骨分化結(jié)果分析
        3.5.3 成脂肪分化結(jié)果分析
    3.6 環(huán)境控制結(jié)果分析
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 論文的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    4.3 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間的研究成果
致謝
附件



本文編號：3792791