目的建立原代大鼠胸腹主動脈平滑肌細胞培養(yǎng)方法,為研究心腦血管動脈粥樣硬化疾病提供重要的載體和工具細胞。方法選取6～8周齡SD大鼠2只,剪開胸腹腔,剝離主動脈,刮除血管內、外膜,經(jīng)0.2%Ⅱ型膠原酶/彈性蛋白酶消化后,剪碎成塊,種瓶進行原代培養(yǎng)。通過細胞形態(tài)學觀察、α平滑肌肌動蛋白免疫細胞化學染色法鑒定所培養(yǎng)的目的細胞。結果接種于培養(yǎng)瓶中的血管組織塊培養(yǎng)48h后開始貼壁;72h后細胞以組織塊為中心,向外遷移,"島嶼狀"細胞團簇初步形成;96h后原代細胞集落逐漸融合,鋪滿瓶底,呈現(xiàn)典型的"峰-谷"樣生長;第一代傳代細胞形態(tài)基本保持不變,高倍鏡下細胞呈三角形或星形。免疫細胞化學染色顯示,細胞α平滑肌肌動蛋白陽性率達99%以上。結論復合酶消化法結合組織塊法能夠成功高效地分離培養(yǎng)出原代大鼠胸腹主動脈平滑肌細胞。

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【文章目錄】：
材料和方法
    1 實驗動物
    2 主要試劑
    3 主要儀器
    4 血管平滑肌細胞原代培養(yǎng)
    5 血管平滑肌細胞傳代培養(yǎng)
    6 形態(tài)學觀察
    7 α平滑肌肌動蛋白免疫細胞化學染色檢測
結果
討論



本文編號：3790375