目的探討X線輻照對體外培養(yǎng)小鼠成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1增殖及其分泌蛋白的影響,為放射性骨損傷的防治提供研究基礎(chǔ)。方法取對數(shù)生長期的小鼠成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1,按輻照劑量分成0 Gy對照組、2 Gy組、4 Gy組、8 Gy組,使用6 MV直線加速器分別予以相應(yīng)劑量的X線輻照,觀察輻照后細(xì)胞形態(tài)的改變,CCK-8法檢測細(xì)胞增殖情況,檢測輻照后7 d細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;收集各組細(xì)胞上清,采用高通量蛋白質(zhì)芯片技術(shù)檢測分泌蛋白的表達(dá)情況,篩選出放射性損傷特異性的差異蛋白,并通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果輻照后MC3T3-E1細(xì)胞胞體腫大,細(xì)胞核變大。與對照組相比,從3 d開始4 Gy和8 Gy組細(xì)胞增殖速度降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),并且增殖降低呈現(xiàn)輻照劑量依賴性。輻照后培養(yǎng)7 d,各輻照組細(xì)胞內(nèi)ALP活性均比對照組低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與對照組相比,輻照后細(xì)胞上清共發(fā)現(xiàn)36個差異表達(dá)蛋白,其中受激活調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(regulated upon activation,nor...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 主要試劑與儀器設(shè)備
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及處理
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 細(xì)胞輻照
    1.3 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    1.4 細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性測定
    1.5 高通量蛋白芯片篩選表達(dá)差異蛋白
    1.6 ELISA驗(yàn)證差異蛋白表達(dá)水平
    1.7 統(tǒng)計學(xué)處理
2結(jié)果
    2.1輻照后細(xì)胞形態(tài)改變
    2.2 輻照對成骨細(xì)胞增殖的影響
    2.3 輻照對成骨細(xì)胞內(nèi)ALP活性的影響
    2.4 細(xì)胞上清液中差異蛋白的表達(dá)水平
    2.5 細(xì)胞上清液中RANTES表達(dá)水平
3 討論



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