NK細(xì)胞是重要的天然免疫細(xì)胞,在抗腫瘤、抗感染的免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要的作用。雖然NK細(xì)胞行使重要的免疫監(jiān)視功能,但在一些情形下NK細(xì)胞的過(guò)度活化會(huì)導(dǎo)致不必要的組織損傷、甚至危及生命,因而,機(jī)體需要通過(guò)某種方式維持NK細(xì)胞的活性,使之處于可控的范圍內(nèi),從而維持NK細(xì)胞對(duì)自身的耐受。與T、B細(xì)胞的免疫耐受相比較,維持NK細(xì)胞對(duì)自身耐受的研究較少,目前認(rèn)為可以通過(guò)抑制性受體介導(dǎo)的方式或活化后誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn),而抑制性受體在NK細(xì)胞與輔助細(xì)胞之間相互作用的過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)控功能。在富含NK細(xì)胞的肝臟中,NK細(xì)胞與輔助細(xì)胞之間的相互作用是NK細(xì)胞介導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答的重要環(huán)節(jié),通過(guò)研究抑制性受體在NK細(xì)胞介導(dǎo)的肝臟天然免疫應(yīng)答中的調(diào)控作用及對(duì)后者造成的病理變化的影響,將有助于了解NK細(xì)胞維持自身耐受的機(jī)制。 主要獲得的結(jié)果有以下兩部分： 1.抑制性受體TIGIT通過(guò)負(fù)調(diào)NK細(xì)胞和枯否細(xì)胞相互作用在急性病毒性肝炎中對(duì)小鼠起保護(hù)作用 我們發(fā)現(xiàn)病毒雙鏈RNA類(lèi)似物poly I:C聯(lián)合肝臟致敏齊D-GalN的注射、或嗜肝病毒腺病毒的急性感染,會(huì)導(dǎo)致TIGIT選擇性地在NK細(xì)胞上... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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摘要
ABSTRACT
目錄
表序
圖序
符號(hào)說(shuō)明
第一章 綜述：NK細(xì)胞在肝臟天然免疫應(yīng)答過(guò)程中維持自身耐受的機(jī)制
    1.1 NK細(xì)胞是重要的天然免疫細(xì)胞
    1.2 NK細(xì)胞與自身免疫性疾病
    1.3 NK細(xì)胞維持自身耐受的機(jī)制
        1.3.1 免疫耐受及其意義
        1.3.2 誘導(dǎo)免疫耐受的方式
        1.3.3 決定免疫耐受的影響因素
        1.3.4 形成免疫耐受的機(jī)制
        1.3.5 NK細(xì)胞對(duì)自身的耐受
    1.4 NK細(xì)胞與輔助細(xì)胞的相互作用
        1.4.0 T細(xì)胞與輔助細(xì)胞的相互作用
        1.4.1 NK細(xì)胞與輔助細(xì)胞的相互作用
    1.5 共抑制分子TIGIT的結(jié)構(gòu)與功能
        1.5.1 TIGIT的結(jié)構(gòu)
        1.5.2 TIGIT在T細(xì)胞上的功能
        1.5.3 TIGIT在NK細(xì)胞上的功能
    1.6 肝臟是天然免疫優(yōu)勢(shì)器官
第二章 引言
    2.1 TIGIT在POLY Ⅰ：C/D-GALN誘導(dǎo)肝損傷及在腺病毒急性感染過(guò)程中的表達(dá)變化
    2.2 TIGIT在肝臟再生過(guò)程中的表達(dá)變化
    2.3 TIGIT在POLY Ⅰ：C/D-GALN誘導(dǎo)肝損傷及在腺病毒急性感染過(guò)程中的作用
    2.4 TIGIT在肝臟再生過(guò)程中的作用
    2.5 PVR在POLY Ⅰ：C/D-GALN誘導(dǎo)肝損傷及在腺病毒急性感染過(guò)程中的作用
    2.6 PVR在肝臟再生中的作用
    2.7 TIGIT與配體相互作用在NK細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)中的作用
    2.8 TIGIT與IFN-Γ之間的關(guān)系
第三章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 試劑配制
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 poly Ⅰ：C/D-GalN誘導(dǎo)肝損傷模型
        3.2.2 腺病毒急性感染模型
        3.2.3 70%肝切除
        3.2.4 細(xì)胞的分離與純化
        3.2.5 組織病理分析
        3.2.6 免疫組織化學(xué)染色
        3.2.7 單克隆抗體純化
        3.2.8 細(xì)胞清除
        3.2.9 血清轉(zhuǎn)氨酶水平的檢測(cè)
        3.2.10 細(xì)胞過(guò)繼轉(zhuǎn)輸
        3.2.11 PVR基因的敲低
        3.2.12 殺傷實(shí)驗(yàn)
        3.2.13 細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
        3.2.14 IFN-γ的ELISA檢測(cè)
        3.2.15 抗小鼠TIGIT阻斷抗體的制備
        3.2.16 NK細(xì)胞-枯否細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        3.2.17 枯否細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        3.2.18 過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.19 干擾載體的構(gòu)建
        3.2.20 復(fù)制缺陷型腺病毒的制備
        3.2.21 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        3.2.22 流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞表面分子標(biāo)記
        3.2.23 流式細(xì)胞術(shù)胞內(nèi)因子標(biāo)記
        3.2.24 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 TIGIT通過(guò)負(fù)調(diào)NK細(xì)胞和枯否細(xì)胞相互作用在急性病毒性肝炎中對(duì)小鼠起保護(hù)作用
        4.1.1 TIGIT不影響NK細(xì)胞成熟標(biāo)志的表達(dá)
        4.1.2 poly Ⅰ：C/D-GalN聯(lián)合誘導(dǎo)小鼠肝臟NK細(xì)胞上調(diào)表達(dá)TIGIT
        4.1.3 TIGIT對(duì)poly Ⅰ：C/D-GalN聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠肝臟損傷具有保護(hù)作用
        4.1.4 TIGIT在poly Ⅰ：C/D-GalN聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠急性肝炎中抑制NK細(xì)胞的活化
        4.1.5 NK細(xì)胞表達(dá)的TIGIT對(duì)poly Ⅰ：C/D-GalN聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠肝損傷具有保護(hù)作用
        4.1.6 TIGIT可能不影響TIGIT非依賴(lài)的NK細(xì)胞功能
        4.1.7 在poly Ⅰ：C/D-GalN聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠肝炎中,TIGIT在NK細(xì)胞與肝細(xì)胞的識(shí)別中的作用不明顯
        4.1.8 枯否細(xì)胞表達(dá)的PVR分子對(duì)poly Ⅰ：C/D-GalN聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠肝損傷具有保護(hù)作用
        4.1.9 枯否細(xì)胞表達(dá)的PVR分子對(duì)枯否細(xì)胞本身產(chǎn)生細(xì)胞因子、遷移以及和NK細(xì)胞相互結(jié)合沒(méi)有明顯的影響
        4.1.10 TIGIT-PVR負(fù)調(diào)控NK細(xì)胞與枯否細(xì)胞的相互作用
        4.1.11 TIGIT-CD112對(duì)NK細(xì)胞與枯否細(xì)胞相互作用的調(diào)控效應(yīng)不明顯
        4.1.12 TIGIT在腺病毒急性感染誘導(dǎo)的肝損傷中對(duì)小鼠起保護(hù)作用
        4.1.13 TIGIT在poly Ⅰ：C/D-GalN聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠肝損傷中的保護(hù)作用依賴(lài)IFN-γ的存在
    4.2 TIGIT通過(guò)負(fù)調(diào)NK細(xì)胞與肝細(xì)胞相互作用對(duì)肝臟再生進(jìn)行保護(hù)
        4.2.1 肝臟再生過(guò)程中NK細(xì)胞上調(diào)表達(dá)TIGIT
        4.2.2 TIGIT對(duì)肝臟再生具有保護(hù)作用
        4.2.3 TIGIT在肝臟再生過(guò)程中抑制NK細(xì)胞活化
        4.2.4 TIGIT對(duì)肝臟再生的保護(hù)作用依賴(lài)NK細(xì)胞的存在
        4.2.5 TIGIT對(duì)肝臟再生的保護(hù)作用依賴(lài)于肝臟再生過(guò)程中肝細(xì)胞上調(diào)表達(dá)的PVR
        4.2.6 TIGIT負(fù)調(diào)NK細(xì)胞與肝細(xì)胞相互作用時(shí)產(chǎn)生的IFN-γ
        4.2.7 TIGIT對(duì)肝臟再生的保護(hù)作用依賴(lài)于IFN-γ的存在
第五章 討論
    5.1 活化性受體CD226和CD96與抑制性受體TIGIT之間的競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系
    5.2 TIGIT配體PVR的抑制性功能
    5.3 TIGIT的調(diào)控效應(yīng)在NK細(xì)胞面對(duì)不同靶細(xì)胞時(shí)的差異性
    5.4 NK細(xì)胞對(duì)肝細(xì)胞增大的調(diào)控
    5.5 TIGIT-PVR相互作用的潛在臨床意義
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間的主要研究成果
    論文發(fā)表情況及專(zhuān)利成果
    會(huì)議論文



本文編號(hào)：3730224